Esterilizacion de medio de cultivo in vitro

Tema en 'Cultivo in vitro de orquídeas' comenzado por ranchu, 2/3/07.

  1. ranchu

    ranchu

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    :52aleluya: hola a todos, siempre he leído este foro aunque es la primera vez que participo, les quería contar acerca de mi experiencia en la esterilización de los frascos de medio de cultivo sin tener que usar la olla a presión (la que tengo en casa es muy chica). Lo que hice fue probar dos formas diferentes una en horno convencional y la otra con el microondas.
    horno convencional:
    -llené 2 frascos de vidrio de gatorade y coloqué medio de cultivo en el horno precalentado a 150-180 °C, y los dejé por 25 minutos.
    -dejé enfriar un poco y luego los trasladé a mi cámara estéril que previamente desinfecté con fluorescente UV 60 min. y posteriormente con lejía comercial al 20%, 10 min. antes de trasladar los frascos.
    -dentro de la cámara también coloqué bolsitas de polipropileno previamente esterilizadas en mi olla a presión (por ser compactas si entraban en mi olla de 6 litros); estas bolsitas de 6x10 pulgadas las usaré para colocar el medio de cultivo. Las bolsitas se esterilizan envolviendolas todas juntas con papel aluminio.
    -una vez que trasladé el medio de cultivo, abrí con cuidado los frascos quitandoles el aluminio que tenían como tapa, y comencé a traspasar a las bolsitas que luego cerré doblando en tres la parte abierta y colocándoles un clip para que lo sujete y no se vuelva a abrir, para mayor seguridad luego las pegué con cinta adhesiva para asegurarme que no ingrese aire contaminado.

    horno microondas:
    - coloqué en frascos de gatorade (vidrio) mas o menos 1.5 centímetros de medio de cultivo, a cada frasco le añadí 1 piedra pomez (mas o menos de 4 a 5 mm), pues según he leído estas evitan que el medio explote (se rebalse) al intentar retirarlos del microondas.
    - Como prueba coloqué 3 de estos frascos y los puse por 5 minutos y gradué el microondas a una ptencia de salida de mas o menos 500 watts.

    Resultados:
    Han pasado 10 días después de la esterilización y las 8 bolsitas de polipropileno y los 3 frascos esterilizados no se han contaminado.

    Espero que les sirva de algo mi experiencia.

    :5-okey: ranchu:5-okey:
     
  2. fjchavez

    fjchavez

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    una pregunta :icon_redface: :icon_redface: :icon_redface: :icon_redface: , con que tapas los frascos de gatorade??? con su propia tapa o con tapones de goma???
     
  3. Hola fjchavez, me parece que ranchu los tapa con alumnio. Pero también puedes provar a tapar los tarros con film de plástico transparente, de ese que venden en el supermercado en rollos para envolver la comida. Este tambíen es muy utilizado en el crecimiento in vitro.
     
  4. ranchu

    ranchu

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    si, yo cometí el error de taparlos con aluminio, pero no es recomendable porque pueden prenderse fuego dentro del microondas, es preferible taparlos con climb wrap, que se usan para envolver los alimentos.