Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Si, se que es de mal gusta engancharse en un tema, por eso es la ultima ves que posteo sobre este tema para no molestar a mas foreros!! Si seguimos la platica Caramelito sera X MPs vale!! y sigo que no es riña, discución o algo así sino aclaración!!


Bueno para empezar me da gusto que las nos informemos bien de los temas para platicar en la misma dimención y empezamos.

Los gases ideales no existen la ley de gay-lussac es la herramienta más cercana que tenemos los ingenieros para explicar el incremento volumetrico exponencial del vapor.

Se cumple al estar constante el volúmen masico, pero no la presión la presión entonces sera exponcial dentro del sistemas de presiones.

Si hay intercambio masico, el sistema no es un siStema aislado, la expulsión de vapor limita a la presión pero no a la tempreatura y P/T=cte, la ley es siempre valida y como te dije es lo más cercano a la realidad sin meternos en eficiencia el que no explote es por la perdida de volumen por ende de la presión.

La primera ley de la termodinamica la puse en el sentido del intercambio entropico del medio y el autoclave, no con el fin de explicar trabajo ni eficienca que es lo que me cuentas!


SALUDO Y SIN ENOJOS!! VA

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola, que tal.

Una disculpa, no me fije que lb/ in cuadradas y psi son lo mismo. Eso es lo que pasa cuando uno postea desvelado y a altas horas de la noche.

Respecto a todo lo que han comentado sobre la presión, quisiera decir que, a pesar de que es una variable que es importante controlar en ciertas industrias, como en reactores químicos, me parece que para este caso no es tan relevante conocer el valor preciso. Las formulas para calcular la presión siempre seran aproximaciones que mejoran por los "parches" que incluyen aun más variables. mejoraron y seguiran mejorando.

Lo importante es que conozcanos los valores de referencia, en este caso la esterilización, no porque sean un dogma, sino porque se han estandarizado para asegurar los mejores resultados. Eso es lo importante, y cada quien encontrara y aplicara los métodos que le garanticen los mejores resultados con el equipo que disponga.

Respecto a eso, disculpa Dulce que no haya contestado antes, tuve un compromiso. Por mi poca experiencia, yo te diria que no afecta volver a esterilizar el medio, pues antes de desechar algunos medios con bacterias, hay que esterilizarlos. OJO, esto yo lo he visto varias veces, pero con agar bacteriológico, incluso quedan más firmes porque se les evapora parte de agua.

Si es probable que temperaturas muy altas, y por el pH del medio, el agar se hidrolice, y por esto ya no cuaje, pero puesa dependera de su calidad (tamaño del polimero). Ahora si que, si con esterilizar una vez, donde sea que tu puedas, te basta y funciona, no abria porque cambiar tu método.

Pues, espero podamos seguir haciendo más aportaciones sobre el cultivo in vitro de nuestras orquideas. Nos vemos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Me voy, porque ya me toca medicamento.
Nos vemos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Siguiendo con el tema de la presión y temperatura, la ley de Gay-Lussac no es aplicable al sistema, ni tampoco la ley general de los gases, se trata de un sistema liquido-vapor en equilibrio, en este sentido el agua hace ebullición a 1 ATM a 100ºC y esa temperatura se mantendrá hasta que se evapore toda el agua.

En la olla de presión colocamos una válvula que tiene un peso y por lo tanto ejerce una presión, entonces la presión externa es la suma de la presión atmosférica más la presión ejercida por la válvula, luego, si aumentamos la presión externa, el equilibrio Líquido-Vapor se desplaza y el agua hervirá a una temperatura mayor a los 100ºC y a la inversa sí la presión externa disminuye, la temperatura de ebullición disminuirá, por ejemplo en la ciudad de México a una P de 590 mm de Hg el agua hierve a 92ºC.

La ecuación que se aplica a los equilibrios de fase Líquido-Vapor es la de Clausisus-Clapeyron, aplicando esta ecuación a una olla de presión de casa, la temperatura de ebullición del agua está en los 106-107ºC y la presión externa en 1.232 ATM, dificilmente una olla de presión para uso en casa alcanzará las 3 ATM, sería muy peligroso.

Datos tomados de Galleano y col. 2008. Understanding the Clausisu-Clapeyron equation by employing an easily adaptable pressure cooker. J.Chem. Edu. 85(2): 276-278.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a TOD@S!!....quisiera saber cuando tengo que utilizar del agar que viene preparado 'P668 Germination Medium' que se encuentra en este lugar http://www.orchidseed.com/media/media.html ....es que ayer una amiga en la sociedad de orquideas me lo regalo y pues nunca eh utilizado este agar ya preparado siempre uso las recetas caseras.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

El link que tu mismo pones dice:

Modified P668 mother flask medium (P669)

Our improvement on P668: by adding some B852 banana powder, this formulation prevents the dreaded “brown-out” of protocorms- developing plantlets that turn brown for no good reason. Contains banana, so it’s probably not good for paph germination, but the concentration is low enough that it won’t faze most “robst” paphs. This is what we use for germination at the OSP, along with Western W2.5 or W3 + coconut. US$6.50 per 1 liter pouch. Contains gelling agent.



Es decir que ya tiene agente gelificante!!!, solo le pones un litro de agua destilada, la mezclas muy bien, la repartes en cajas de petri, frascos, envases, etc, etc, al autoclave y listo!!!!


SALUDOS!!!

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Muy buenas,alguien sabria decirme por que los protocormos que tengo in vitro estan pasando del color verde que tenian a un colo blancuzco y han dejado de crecer?

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Lamento ser Yo el que lo diga, pues asi me paso a algunos de mis frascos
Los frascos deben recibir luz, pero no sol.
Y aveces donde los tenemos, por las mañanas o tardes les da el sol directo aunque sea por unos minutos y con eso basta, se mueren, se ponen blancos y ya con eso terminan
Espero que no sea ese el caso de vuestros frascos. Espero equivocarme.
Le deseamos lo mejor
No es facil aprender sobre la marcha

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Creo que el problema debe de ser otro porque donde tengo los frascos reciben buena claridad pero ni un solo rayo de sol y con ellos tengo otro frasco con plantas ya apunto del desenfrascado y estan bien,es posible que el medio de cultivo haya quedado muy duro por el agar? Gracias compañeros

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Según mi experiencia, que a mí me ha pasado lo miso (creo) ese parón en el crecimiento y el color blanco se debe a una temperatura demasiado alta.

En mi caso, por si te puede servir, tuve los frascos encima del frigorífico con una barra fluorescente para que tuvieran luz y calor. Lo malo es que hay un radiador justo al lado del frigo (sí, sé que es extraño pero es así). Los brotes que más crecieron, unos 3cm. tomaron color blanco y el medio color negro. Sé que no son hongos porque esos frascos llevan allí 15 meses y siguen como hace un año.
Lo peor de todo es que aunque no hay contaminaciones en mis frascos, no he logrado que nada haya vuelto a germinar.

Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola, como estan.

Orquidista, te comento que cuando compre un frasco con varias plantas, también se pusieron blancas. En mi caso, también creo que el factor fue la temperatura, un cambio brusco aunque en mi caso creo que fue por una baja temperatura. Creo que vale la pena considerar, en caso de ser posible, la especie o especies progenitoras, y cuales son las condiciones de temperatura a las que crecen en su habitad. Podria hacerse una comparación con algo que me dijo una doctora, y después lo vi, que el maíz es una especie tropical, y necesita temperaturas calidas para crecer. Los embriones germinaban muy bien a 29 0C, y las plantas crecian muy bien.

¿Ya estaban sacando raices cuando empezaron a ponerse blancos? o porque sospechas de un exceso de agar.

aincioa, gracias por compartir tu anecdota. Me dejaste una duda, nos podrias poner una foto de esos frascos? Porque por lo que dices del medio negro, suena parecido a las exudaciones fenolicas que menciona Monstera en su blog, pero eso es en varas de phal.

En mi caso personal, yo consideraba que el carbón activado que se agrega a medios artificiales (los que venden para preparar, con contenido de sólo sales) es precisamente para eso, porque esos productos de la planta retrasan el crecimiento. Pueden estar presentes muchas sustancias que resultan tóxicas para las plantas, y que con un medio artificial se controla esa variable.
Si tiene otra función, que alguien me diga por favor, porque para ese caso, yo pensaria que en un medio casero no tiene mucho caso poner carbón si pones jitomate o platano, mejor PVP. O hacer repiques si es necesario.

Saludos, y sigan compartiendo.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a todos. Aunque es difícil asegurar cuales son las causas (por los que no somos expertos), tras varias pruebas que he realizado creo haber reducido las posibles causas a:

- Si el medio está muy líquido o tienen más humedad de la que pueden soportar, sufren un estrés hídrico, se ponen transparentes y mueren.
- Si llevan mucho tiempo en el mismo medio o hay saturación de protocormos o plántulas, puede ser que hayan consumido todos los azúcares del medio. Mientras entán en los frascos y no tengan varias raíces funcionales, su principal alimento son los azúcares, los cuáles, cuando se agotan, se quedan sin alimento,poniéndose marrones y en un par de días mueren.
- Si tienen temperaturas muy altas, literalmente se cuecen dentro del frasco. Si el interior de los frascos se calienta mucho, aunque el exterior se enfríe, el interior seguirá caliente durante un buen rato.
- Otras veces es por culpa de las semillas. Nacen muy bien pero por algún problema genético o de viabilidad dejan de desarrollarse y mueren.
- Otras veces es un misterio. A mí me ha ocurrido que al sembrar varios frascos con las mismas semillas, el mismo medio de cultivo y recibiendo todos la misma luz y temperatura, unos frascos se desarrollan perfectamente y otros se vuelven transparentes o marrones y mueren.

Ésta es mi opinión. Si algún experto cree que estoy equivocado, por favor que me corrija.

Espero haber ayudado

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Buenas tardes compañeros.
Ayer porfín realice mi primer intento de in-vitro, conseguí algunas semillas y me puse a ello.Pero ahi me quede en el intento. Después de dejarlas 24h en agua con azucar vino la odisea de sacarlas de donde estaban... se perdieron unas pocas. Y esterilizando el papel de flitro no debia de ser del todo bueno o yo un poco impaciente que cuando lo mire tenia un agujero por donde se habían ido la mayoría... en fin. Tengo que cambiar mi método, dejarlas en agua con azucar dentro de una jeringuilla y sacar ese agua con otrao no se.
He visto también otra forma que es poner las semillas en el medio y entre la tapa y el medio un flin traspatrente con un algodón con lejia y el flin con un agujero, se cierra y se espera unas 3, 4 horas, y los vapores hacen lo suyo. Habrá que probarlo.
Espero que tengan mas suerte y buena siembra

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Muy buenas,creo que el problema de que se pusiesen blancas puede ser como me comentaban un cambio de temperatura brusco,porque es cierto que durante tres o cuatro dias utilice la calefaccion en esa habitacion y tuvieron cambios de temperatura,aunque ya habia alguna semilla blanca de hacia tiempo,muchas gracias por las aportaciones compañeros.