Cultivo in vitro y las orquídeas

Tema en 'Cultivo in vitro de orquídeas' comenzado por arti-lop, 30/8/07.

  1. arti-lop

    arti-lop

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    EL CULTIVO IN VITRO Y LAS ORQUÍDEAS.

    Por Innan Godínez García.

    Único por sus bondades, el cultivo de tejidos vegetales in vitro puede ser la salvación de la extinción de muchas de nuestras especies de orquídeas y no sólo quedarse como herramienta en la propagación masiva de orquídeas de interés comercial.
    Está basado en el uso de medios de cultivo ricos (compuestos orgánicos e inorgánicos), fuentes de carbono, vitaminas, aminoácidos, controlando aspectos físicos (temperatura, humedad, pH, fotoperiodo-intensidad lumínica) trabajando en un ambiente asético; utilizando material y medios esterilizados y usando envases estériles también (tubos de ensayo, frascos de vidrio, etc).
    Se puede utilizar para obtener plantas libres de virus, la propagación masiva, obtención de clones (individuos genéticamente idénticos) de plantas sobresalientes y germinación asimbiótica de semillas de las orquídeas. Todo esto en un corto plazo.

    Germinación de semillas de orquídea.

    Las semillas de orquídeas son conocidas como semillas de "polvo" porque son minúsculas y contienen pocas reservas de alimento. No germinan en el medio natural a menos que sean infectadas por un hongo llamado micorriza, el cual abastece a las plantas jóvenes con azúcares y nutrientes que necesitan hasta que son lo suficientemente grandes como para fabricar su propio alimento.
    Sin embargo en 1974 knudson conmocionó e impulsó el mundo de las orquídeas, demostrando que las semillas eran capaces de germinar asimbióticamente es decir sin la presencia del hongo micorrízico, in vitro.
    Esta germinación se logra gracias a la disponibilidad directa de azúcares, vitaminas, y otros compuestos que tienen las semillas (embrión) en el medio de cultivo para lograr germinar sin necesidad de intermediarios (hongo micorriza).
    Cuando la semilla germina produce una masa indiferenciada de células llamada protocorno. Manteniendo las condiciones adecuadas, el protocorno continuará su crecimiento por varias semanas, meses, o incluso años dependiendo de la especie, hasta que alcance la edad apropiada para producir raíces y hojas.
    Una vez que la plántula ya posee los órganos apropiados (raices y hojas) para que sobreviva por si sola, se procede a sacarla del envase con medio de cultivo donde germinó para aclimatarla a las condiciones naturales.
    Este proceso recibe el nombre de "pase a suelo"; es el más complicado dentro del cultivo in vitro. Sin embargo el secreto está en buscar la combinación adecuada de corteza, fibra de coco, y peatmoss (musgo canadiense) como medio de cultivo además de que la humedad relativa se debe ir bajando poco a poco. Esto en un trnascurso de tiempo no menor a 2 meses. De ese momento en adelante, en cuanto a los cuidados de la planta ustedes son expertos.

    Tomado del Boletín Octubre 2006 de la AMO.

    :5-okey:
     
  2. Re: El cultivo in vitro y las orquídeas.

    GRACIAS ARTI, POR TODA LA INFORMACIÓN.
    HACE MUCHO TIEMPO QUE HE QUERIO HACERLO, PERO ME DA UN POCO DE MIEDO.....PERO COMO DICE EL DICHO:HECHANDO APERDER SE APRENDE.

    SALUDOS.
     
  3. patidiux

    patidiux

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    Re: El cultivo in vitro y las orquídeas.

    Una pregunta Arti y el hongo ese llamado micorriza de donde sale o como se consigue es el moho verde de la humedad o es otra cosa salu2.
     
  4. arti-lop

    arti-lop

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    Re: El cultivo in vitro y las orquídeas.

    Hola Patidiux, dejame leerte algo:

    SEMILLAS Y GERMINACIÓN

    La agregación de los granos de polen en polinios constituyó la respuesta evolutiva a la necesidad de fertilizar miles o millones de óvulos en un solo evento de polinización. Con muy pocas excepciones, los frutos de las orquídeas son cápsulas que al madurar presentan varias aberturas longitudinales a través de las cuales son liberadas las semillas. El número de semillas por fruto varía entre unos pocos miles y cuatro millones; su tamaño es muy pequeño, miden entre 0.3 y 4 mm de largo y pesan por lo general entre 0.4 y 2microgramos(Arditti, 1992).
    Al ser liberadas las diminutas semillas, que están envueltas por una cubierta delgada y llena de aire, pueden flotar y ser transportadas cierta distancia por el viento. Sólo en las vainillas y en el génro cypripedioideo sudamericano Selenipedium los frutos son carnosos y perfumados al madurar, con lo que atraen animales que los comen y dispersan las semillas, que en estos casos tienen una cubierta gruesa. Al menos en las vainillas con frutos fragantes la dispersión de las semillas es efectuada por murciélagos(Soto,2003).
    El reducido tamaño de las semillas es una severa limitante al tamaño del embrión. Por ende, en las orquídeas éste es diminuto e indiferenciado, es decir, no presenta órganos incipientes como en las semillas de muchas otras plantas, sino que consiste por lo general en una mera masa de células. La semilla carece de reservas nutritivas, por lo que su germinación requiere la asociación del embrión con ciertos hongos que le proporcionen nutrientes. Por lo tanto, al menos durante la germinación la mayoría de las orquídeas son micoheterótrofas obligadas. Si después de salir de la cápsulas madura la semilla llega a un ambiente con las condiciones fisicoquímicas y de humedad apropiadas, en el que además se encuentre el hongo adecuado, el embrión absorve humedad y aumenta de tamaño, y en algunos casos llega a reventar la cubierta de la semilla. Las hifas del hongo penetran a la semilla generalmente a través de un poro situado en uno de sus extremos e "infectan" el embrión. La infección no es indiscriminada, sino que se restringe a una zona en la parte inferior del embrión en crecimiento, que como resultado de divisiones celulares ahora forma un cuerpo más voluminoso llamado protocorno. El crecimiento del hongo dentro del protocorno es controlado mediante sustancias reguladoras producidas por la orquídea llamadas fitoalexinas (Arditti 1992). Las hifas crecen formando pelotones que después son digeridos, de manera similar a como ocurre en las raíces con micorriza. En un momento dado, las células del protocorno empiezan a diferenciarse para dar lugar a tallos, hojas y raíces (o rizoides), y es capaz, al menos en potencia, de vivir de manera autónoma, aunque la infección puede "migrar" a las jovenes raíces y transformarse en una micorriza en sentido estricto (P. Ortega Larrocea, com. pers., 2005). Esta fase de plántula como protocornos micoheterotróficos parece ser una característica exclusiva de las orquídeas.

    Tomado del libro "Las Orquídeas de México"

    Entonces con esto concluímos que ese hongo es indispensable para la germinación y crecimiento de la plántula, pero en el artículo del cultivo in vitro dice que Knudson en 1974 logró la germinación sin tener ese hongo, por tal motivo el cultivo in vitro es asimbioticamente, esto quiere decir sin tener que recurrir a la unión de semilla+hongo, esta simbiosis se lleva a cabo en la naturaleza. por esa razón si tienes la oportunidad de ver orquídeas en su hábitat natural veras crecer plantulas junto a las raices de las madres.
    Espero no haberte enredado, saludos.
     
  5. patidiux

    patidiux

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    Re: El cultivo in vitro y las orquídeas.

    :52aleluya: :sorprendido: No no me enrede, lo que pasa es que tengo que leer bien lo que me dices, ya tenia yo una idea de tanto que me meto al internet a aprender, pero definitivamente esto que me pusiste ya me saco toda duda, y no andaba tan perdida me imaginaba que los animales jugaban un papel importante:11risotada: y lo de Knudson eso si que es pasión por las orquideas, como me gustaria porder cultivar in vitro, pero eso es tan díficil y sofisticado que:( no puedo ni modo, me conformo con las que tengo y hay poco a poco las divido bueno Arti gracias por la molestia y disculpa si no te contesto rapido. salu2.
     
  6. evarosa

    evarosa

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    Re: El cultivo in vitro y las orquídeas.

    He estado leyendo y la verdad es que el articulo está muy interesante. Pero tengo una pregunta. Al hacerlo in vitro, ¿cuál es el medio de germinación?. es decir, ¿ qué es lo que sustituye al hongo?. Porque no meterá solamente la semilla en un recipiente de cristal y ya está. ¿ no?.
     
  7. arti-lop

    arti-lop

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    Re: El cultivo in vitro y las orquídeas.

    Gracias Patidiux.
    Evarosa, las semillas de orquídea son tan pequeñas, que no tienen suficiente nutrientes para alimentar al embrión, por eso necesitan forzosamente un hongo microscópico(micorriza) que se adhiere a la semilla y alimenta a la planta conforme va creciendo, ya germinada la planta puede seguir viviendo en simbiosis o no con este hongo, el problema para nosotros los humanos de hacer germinar las semillas con hongos, radica en que cada orquídea tiene su propio hongo y el que alimenta a una puede destruir a otra. Knudson lo que hizo fue inventar un medio de cultivo con suficientes nutrientes para alimentar al embrión sin tener que utilizar a un hongo, para eso existen muchos medios de cultivos que como dice en el artículo "medios de cultivos ricos, fuentes de carbono,aminoácidos, vitaminas" etc.
    Para explicarlo mejor, es parecido a los medios de cultivo que se utilizan en laboratorios para bacterias y diversos microorganismos.
    No te he enredado?
    Si tienes más dudas, con confianza hazlas, que todos estamos aprendiendo.;)
     
  8. evarosa

    evarosa

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    Re: El cultivo in vitro y las orquídeas.

    Si si lo del medio de cultivo lo he entendido. Las bacterias de laboratorio se reproducen en un medio de cultvo como el agar-agar. Y mi pregunta era, para las orquideas in vitro ¿ cuál es el medio utilizado exactamente?.
    He leido en el foro, que hacian mención a jugo de tomate o zumo de limon. Pero ¿ no especifica Kudson Cual es el que él utilizo ?
     
  9. Re: El cultivo in vitro y las orquídeas.

    yo te pregunto lo mismo cual medio utilizo ????
    gracias Silvia
     
  10. Marauder

    Marauder cultiva en nanoespacios

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    Re: El cultivo in vitro y las orquídeas.

    Saludos!

    Este servidor se ha propuesto como desafío personal hacer germinar semillas de orquídea.
    Aprovechando los conocimientos que da el haber hecho la carrera de Biología (especialidad de biología molecular y biotecnología), tengo en mente desarrollar un protocolo de germinación "casero". Es decir, empleando materiales y técnicas que estén al alcance de cualquier aficionado al cultivo de orquídeas. Es una idea ambiciosa, porque por mucho que se simplifiquen el proceso y las herramientas, no deja de ser una tarea difícil con un alto índice de fracaso.
    Por el momento me encuentro en estado de buena esperanza tras una polinización exitosa de mi Phalaenopsis (más me vale porque es la única que tengo). En cuanto desarrolle las semillas me pondré manos a la obra y dejaré aviso en este hilo para quienes les pueda interesar esta alocada idea.

    ;)
     
  11. arti-lop

    arti-lop

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    Re: El cultivo in vitro y las orquídeas.

    Hola a todos, les paso el link de turrusta que puso al respecto, se llama "Fórmulas para el medio de cultivo de semillas de orquídeas"
    www.infojardin.com/foro/showthread.php?t=51906

    Se supone que la primera es la fórmula de Knudson, yo en lo personal nunca he hecho cultivo in vitro, ya que no basta con tener la formula, pero un amigo se dedica a eso y lo que el hace es lo siguiente:
    Prepara el medio de cultivo(mezcla todos los ingredientes) y lo pone a hervir un vez que la mezcla está lista, las vacia en frascos de vidrio los cuales tapa hermeticamente (se supone que nodebe de entrar nada), y pone a esterilizar en un autoclave, una vez esterilizados se dejan enfriar y ya estan listos para hacer la siembra.
    Nunca he visto como siembra, pero me ha explicado lo siguiente:
    Tiene un lugar preparado para ello, utiliza un tipo de caja (como las cunas incubadoras, con agujeros para poder introducir las manos (con guantes), se supone que todo está aseptico, entonces puede habrir la cápsula (previamente lavada en cloro al 20%) y hacer la siembra, tapando nuevamente los frascos y posteriormente los coloca en los sitios preparados para ellos, que son estantes con sus lamparas deacuerdo al requerimiento de luz necesaria. A groso modo ese es la experiencia que yo he tenido con el cultivo in vitro;)
     
  12. evarosa

    evarosa

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    Re: El cultivo in vitro y las orquídeas.

    Marauder, ¿ puedes decir como has hecho la exitosa germinación? No sé por qué pregunto tanto, no tengo ni siquiera semillas de orquideas, pero el saber no ocupa sitio y si algun dia me da por......
     
  13. Marauder

    Marauder cultiva en nanoespacios

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    Re: El cultivo in vitro y las orquídeas.

    Evarosa:

    Todavía no he germinado semillas de orquídea, estoy esperando a que mi Phal termine de madurar las suyas para ponerme manos a la obra.

    Mis experiencias con el cultivo in vitro son de los tiempos de la Facultad. Allí tuve la ocasión de propagar melón cantaloup (de una semilla sacábamos 8 plantas) y obtener embriones a partir de la hoja de un magnolio. Esto último es muy espectacular, de un trocito de hoja consigues una masa de tejido indiferenciado verde. Luego, con el tratamiento adecuado, esa masa genera embriones que después darán lugar a plantas completas. De una sóla hoja de magnolio se pueden obtener cientos de plantas.
    Lo más divertido era jugar con las hormonas y conseguir que brotaran flores de una masa verde en una placa de Petri...
    ¡¡Qué tiempos aquellos!!

    :11risotada:
     
  14. matias24

    matias24

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    Re: El cultivo in vitro y las orquídeas.

    que es vintro no se pero me interesa como suena alguien me puede ayudar a aclarar mis dudas
     
  15. arti-lop

    arti-lop

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    Re: El cultivo in vitro y las orquídeas.

    Evarosa, para polinizar una flor, se ponen los polinios de otra flor en el rostelo, los polinios los encuentras en la punta de la columna, hay una especie de capucho, lo levantas con un palillo de dientes, y tomas los polinios con el mismo palillo, estos lospones en el rostelo, o la cavidad que se ve en la columna :16duda: no te enrede?:97chiribitas:
    Maraunder, que facinante lo que haz hecho, así como lo cuentas más que germinar semillas creo que podrías hacer cultivo meristematico, en este tipo de cultivo, se utiliza una parte de la planta en crecimiento (el meristema) y de él puedes sacar muchas plantas que sería 100% identicas a la planta madre, este tipo de cultivo se utiliza para multiplicar principalmente las plantas que valen mucho por ejemplo las campeonas o que han recibido alguna medalla, es mucho mejor porque es más rápido que por medio de semilla, si puedes hacerlo, adelante, seguramente podras dentro de poco poner tu propio orquidario con venta de plantas:5-okey:

    Matias, puedes ser un poco más específico, en cuanto a tus dudas?
    se llama cultivo "in vitro", que es el término que se utiliza para hablar de laboratorio, o sea por decirlo así un cultivo artificial, o mejor dicho con intervención directa por el homre y no la naturaleza.
    Pregunta, que seguro habra quien te saque de dudas.;)
     
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