Cultivo in vitro

Claro, por cierto ya subieron los videos del curso, pongo los links no mas los encuentro jeje.

 

estoy en segundo y voy a pasar a tercero
no sé qúe composición llevan los sobrecitos pero luego lo miraré

 

qué curso?

 

Es que el dio un curso express sobre el cultivo in vitro.

 

ah sí??
y hay vídeos??
qué guay!!

 

Si, fue un buen curso, creo q yo e subido unas fotos jeje

 

Excelente tema Acourtia! muy buenas fotos y todo muy bien explicado. Ya he recibido el medio MS y he comenzado con los cultivos in vitro, dentro de poco abriré un nuevo tema ya que los explantos están respondiendo bien a 10 días de la siembra, espero verte por allí con algun consejo
Nogueras, las hormonas de enraizamiento comerciales suelen llevar AIB (Ácido indol butírico) al 4% o ANA , en el cultivo in vitro primero se suelen usar citoquininas (kinetina, BAP, etc) para la multiplicación celular y elongación de tallos, con una baja concentración de auxina (ANA o IBA). Lo importante son las relaciones en la concentración auxina-citoquinina, ya que ésta relación es diferente para cultivos de meristemos, organogénesis, embriogénesis somática, etc.. es la magia del asunto. El problema que tendrás para usarlos es conseguir la concentración adecuada (del orden de 1 o 2 mg/L), para ello lo mejor es prepararse soluciones stock de 1mg/ml.
Un saludo!

EDITO: Acourtia, se me olvidaba y quería preguntarte algo:
A la hora de propagar in vitro plantas que proceden del exterior, a menudo los protocolos habituales de desinfección no son suficientes, y me gustaría saber si utilizas, o has utilizado algún antibiótico del tipo gentamicina o similar en bajas dosis para prevenir posibles contaminaciones bacterianas, sobre todo cuando hablamos de propagación de tubérculos en los que habitan colonias bacterianas en su interior (ej:zanahoria). En este caso, tengo dudas sobre si afectaría al correcto desarrollo del explanto.
Muchas gracias!

 

muchas gracias! jej algo así recordaba de las clases
yo de todas formas seguiré mirando a ver si puedo conseguir algo y puedo algún día hacer reproducción in vitro

 

En este caso particular si puedes emplear antibioticos a bajas dosis, sólo ten en cuenta que la gentamicina es para controlar bacterias gram positivas y por tanto, si el tubérculo tiene bacterias gram negativas no servira. Necesitas hacer una tinción de gram para saber que tipos de bacterias tiene tú cultivo in vitro y con esté dato elegir el antibiotico. Si he utilizado antibioticos para controlar contaminación bacteriana y no vi algun efecto negativo sobre el cultivo de los explantes de alfalfa.

Otra opción es preparar el medio de cultivo y adicionar dicloroisocianurato de sodio(NADCC). Es un compuesto muy utilizado para la desinfección del agua de albercas, para lentes de contacto y para purificar el agua que beben en comunidades donde no hay agua potable. En el medio de cultivo va liberando pequeñas cantidades de cloro, de tal forma que si tu explante tiene una contaminación endogena, el cloro liberado continuamente por el NADCC servirá para controlarla.

 

Muchas gracias es la primera vez que oigo hablar del NADCC, pero por lo que veo es bastante barato y fácil de conseguir. Lo tendré en cuenta en futuros cultivos.

 

Les pongo un video que me pasaron, fue igual de el curso que nos impartió el sensei acourtia, me tocó ser verdugo jeje:


http://www.youtube.com/watch?v=QFs3YmgKO1k

 

Ahora voy a mostrar los resultados de la siembra de 5 semillas de Roridula gorgonia.

Bueno la desinfección fue con clorox al 20% por 15 minutos, lavado en agua destilada estéril 15 minutos y siembra en el medio MS. Hoy les muestro la germinación de dos semillas, en las siguientes fotografías.





A pesar de haber leido lo que se dice, sobre la germinación de las semillas de está especie, como la de aplicar humo, ácido giberelico, que las semillas sean frescas etc, decidí sembrarlas sin ninguna tratamiento, y sorpresa germinarón.

A veces se dice tanto sobre la germinación de una especie y lo difícil que es germinar sus semillas, que desalientan a las personas interesadas. Yo parto del hecho de que el cultivo in vitro nos brinda un ambiente controlado y que las semillas pueden germinar en el.

 

Buenas a todos!!!

Me he leído todo el post porque me gusta mucho el cultivo in vitro y actualmente estoy trabajando en ello con semillas del patrón Citrange carrizo (cítrico). Quería comentar unas cosillas acerca del protocolo que se explicó al principio:

1) Cuando se esteriliza material sólido ( pinzas, etc) se suele utilizar en el autoclave ( o en su defecto olla a exprés ) unos 121ºC durante 30 minutos, ya que 15 minutos es poco tiempo.

2) Para desinfectar las semillas, en lugar de envolverlas en papel de filtro y luego graparlo, lo que hago es utilizar gasas estériles de las que se tienen en cualquier botiquín. Son cómodas y muy prácticas.

3) Cada vez que se trabaja con pinzas estériles, se debe "flamear" contínuamente, esto quiere decir, introducirlas en alcohol 96% para después pasarlas por un mechero.

Bueno, esto es lo que yo hago en el laboratorio y lo que normalmente se suele hacer, pero como es lógico, depende también del grado de asepsia que se busque.

Un saludoooo!!!

 

Por cierto Acourtia, otra dudilla que me acaba de surgir. Dado que soy un ignorante por completo de las plantas carnívoras, cuando ya has colocado las semillas en el medio, ¿ las conservas en cámaras de cultivo con algún fotoperiodo o directamente las dejas a la luz natural?

Un saludo

 

Hola Burn, buenas observaciones. Bueno te comento, para esterilizar es suficiente 121 ºC 15 minutos, pero puedes alargar a 30 minutos si asi lo deseas. Sobre la forma de esterilizar las semillas, como algunas son muy diminutas(1mm<) no es funcional la gasa, en semillas mayores de 0.5 cm la gasa es superior al papel filtro. En cuanto al grado de asepsia, en in vitro es del 100 %.

Tú observación número tres es muy buena y no la había mencionado.

Los frascos con plantas los dejo a temperatura ambiente y con ciclos de luz natural, de la localidad donde vivo.En lo demás totalmente de acuerdo, se ve que tienes experiencia en el cultivo in vitro.