Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola, joer que nivel Acourtia, te pesas todo en casa con balanza analítica, supongo que a la larga te saldrá más barato, aunque de primeras..uff es una buena inversión. Yo estoy esperando a que me llegue ésta semana o la siguiente material concentrado para 50 l de medio MS que encargué a:

http://www.phytotechlab.com/?gclid=CJbZ7OKs5poCFQOcFQodsErqAw

La página está genial, también he podido adquirir todo tipo de hormonas, frascos y demás, lo malo es que al ser de USA tarda en llegar que no veas (llevo meses esperando) Creo recordar que tienen un montón de medios específicos para orquideas, auque no me he metido mucho en ese terreno ya que voy más a por las hortícolas.
Un saludo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Primero debo recordarles que este post es de Monstera y pido disculpas por inmiscuirme Monstera todo el credito de este post es tuyo, si puedo aportar algo, de lo mucho que han logrado bajo tú acertada dirección, lo haré si tú no tienes inconveniente.

Un abrazo, saludos y felicitaciones Monstera¡¡¡.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

pienso q la finalidad de este foro es que todos los que participan aporten sus conocimientos para tratar de aprender o despejar muchas dudas que se nos presentan, creo que toda la colaboracion es buena porque hasta de los errores se aprende, yo por ejemplo debo a este foro la mayoria de cosas que se sobre las orquideas, y cada dia aprendo algo nuevo. gracias a las experiencias de todos los foreros. textualmente: GRACIAS.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a todos,

Troncotron cuanto tiempo me alegro de verte por aquí.

Acourtia, como akidesousa muy bien dice, la finalidad de este foro es que todos participemos para enriquecernos mutuamente.
Por supuesto que tú y cualquiera, haga in vitro o no, es bienvenido a hacer aportaciones en este post. Desde luego después de 20 años haciendo cultivos seguro que nos vienen de maravilla tus comentarios.

Un abrazo,

Olivia

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Gracias Monstera

Akidesousa el medio Knudson es más simple en su composición que el MS y por tanto más económico, si quisiera germinar semillas de orquídeas o de cualquier tipo, eligiría un medio casero o el Knudson y cuando hayan germinado las semillas, pasaría los PLB al medio MS completo(CUIDADO hay multiples variantes del MS). MS completo significa que tiene los macro, micro y vitaminas.

Troncotron tiene más de 5 años que no compro reactivos químicamente puros para preparar el MS, lo qué más compro es azúcar y agar, además, si no tienes balanza analítica, puedes preparar soluciones concentradas(asi evitas pesar miligramos) y mantenerlas en refrigeración y después calcular cuántos mililitros, de cada solución se requerirán para preparar el medio. Con los reactivos del medio MS puedo preparar también el Knudson, el Gamborg, etc. y definitivamente sale más económico prepararlo que comprarlo.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

cual es el tiempo para estirilizar en el micro ondas?

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola,

Akidesousa, no se cuánto tiempode microondas para esteriliza, las tapas de mis frascos son de metal, por eso no lo he usado nunca. A ver si alguien lo sabe.

Yo no se nada de química, así que me tengo que conformar con los tomates o comprar al final me tendré que apuntar a un cursillo de verano...

Un saludo,

Olivia

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Saludos olivia..por aca leyendo vi que estas utilizando el carbon activado, me gustaria que me comentaras exactamente para que sirve, por lo que e leido es antifungico y ayuda al desarrollo de las raices por oscurecer el medio, esto es verdad??...que resultados te a dado?...gracias de antemano por tu respuesta..

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Siembra de semillas de capsulas abiertas

Antes de iniciar deberas colocar en tu caja de plástico, frascos con medio de cultivo ya estériles, un frasco o dos con agua estéril, un frasco con la solución desinfectante preparada, pinsas de disección, pipetas pasteur o jeringas con las semillas de orquideas en su interior(ver más adelante los detalles) y ahora desinfecta tu caja con la solución de cloro y espera el tiempo necesario, 20 a 30 minutos.

Preparación de la pipeta o jeringa, en la foto a la izquierda está la semilla, le sigue una pipeta pasteur que tiene un trozo de algodón en la punta(en su lugar pueden usar una jeringa de insulina de 1 mL), después se coloca otro trozo de algodón en el otro extremo, las pipetas o jeringas asi preparadas se colocan en la caja de plástico.


Ahora con ayuda de un bulbo se aspira la solución desinfectante lentamente(1 mL de cloro comercial más 9 mL de agua comun con una gota de detergente líquido, si no tienen manera de medir 1 mL, entonces un volumen de cloro comercial más 9 volumenes de agua) hasta llenar la pipeta pasteur o la jeringa.

Si la aspiración se hace muy rapido el algodón se desprende de su sitio y las semillas se contaminan de nuevo. El algodón tiene la función de no permitir la entrada de esporas hacia la pipeta o jeringa.

Inviertan la pipeta o jeringa constantemente para que todas las semillas estén en contacto con la solución, y hay que dejar actuar de 10 a 15 minutos. Pasado ese tiempo orpimir el embolo de la jeringa lentamente hasta sacar toda la solución desinfectante (o con el bulbo si usas la pipeta pasteur), el algodon no debera moverse de su sitio.

Para retirar los restos de cloro de las semillas, se aspira agua estéril hasta llenar la jeringa, el agua está contenida en un frasco, cuidando de que el algodón no se desprenda de su sitio, agitar constantemente la jeringa para lavar bien las semillas, después de 10 minutos, expulsar el agua de la jeringa con cuidado y repetir el lavado dos veces más.

En el último lavado, con la jeringa llena de agua más las semillas, se retira el tapón de algodón con las pinzas de disección estériles y la solución de agua más semillas se deposita en los frascos con medio de cultivo. Caro que muchas semilas se quedarán adheridas a las paredes de la jeringa o pipeta.

Es mucho trabajo pero la recompesa es mayor¡¡¡

Espero haber expresado todo de manera entendible..

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a todos,

Pablo, cuánto tiempo! Cómo va? El carbón activado lo he empezado a usar hace poco, en principio para el cultivo de varas, para absorver las exudaciones fenolicas y otras impurezas.

Lo de que es mejor por que es oscuro no lo había leido en ningún sitio.

No se si se nota mucho la diferencia, pero mal no parece hacerles.

Acourtia, ha quedado muy didáctico, muchas gracias. Yo prefiero usar la jeringuilla con papel de filtro en vez de algodon, porque prácticamente no se pierden semillas y coómo tengo pocas, las trato como si fueran un tesoro . Las empujas con el embolo y del papel se despegan facilmente. Igual es que soy muy torpe pero yo y el algodón no nos llevamos demasiado bien... Por lo demás el método es el mismo lejía comercial 1, agua destilada 9 y gotita de jabón. 10 -15 min. y si son oscuras hasta que queden de color crema, enjuagar y para el frasco.

Has notado diferencia en la germinación, dependiendo de la cantidad de líquido que queda sobre el medio?

Un saludo,

Olivia

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Monstera, gracias y enhorabuena por este post tan interesante
De momento no manejo nada de orquídeas, aunque si sigo leyendo por aqui no tardaré mucho en meterme en estos berenjenales .. No obstante el cultivo in vitro me apasiona, y como veo que por el foro no se ha hablado casi de micropropagación, cultivo de meristemos,embriogénesis etc de hortícolas (o por lo menos no encuentro donde ), dentro de poco me lanzaré a probarlo todo en casa. Poco a poco voy montando un minilaboratorio de cultivo aficionado, y lo que comenta Acourtia de los medios me parece muy interesante a medio-largo plazo.
Por cierto, igual me voy del tema pero, habeis probado a utilizar LEDs para la cámara de cultivo? creo que es una buena opción de abaratar costes si tiene que estar 16h/día funcionando, además de no gastar nada duran un montón de años y se han desarrollado espectros adecuados para el crecimiento de las plantas.
Saludetes

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola Troncotron, he pensado muco en lo de los LDES pero no he sacado mucho en claro, si tu nos puedes "poner algo de luz" en el tema sería genial...jajaja

Lo de los medios para empezar puedes usar uno casero, la verdad dan muy buenos resultados y luego ir haciendo cambios o pasarte a uno comercial.

Me encantaría hacer cultivo de meristemas, pero lo dejo para cuando sepa más.

Un saludo,

Olivia

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a todos!
troncotron,cuando intentes el cultivo de meristemas nos cuentas como lo haces y que tal te va,a mi tambien me interesa muchos y se algunas cosas al respecto,pero no e conseguido casi informacion, mas adelante tambien me gustaria intentarlo...
una pregunta,alguien sabe si el agar se puede sustituir por gelatina sin sabor, e escuchado de gente que usa esta. yo no e podido conseguir el agar aca,si alguien de Colombia lo a conseguido le agradeceria que me dijera donde...saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

WAWWW!!! Te felicito tienes una mano fabulosa para ser la primera vez yo ya tengo dos capsulas y intento hacer el invitro. Tengo una pregunta.
Para la esterilizacion de los frascos con el medio le pones agua a la olla?

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola!! antes que nada un saludo a todos perdon por intrometerme en su foro jeje

Si, para la esterilizacion si la vas a ser en olla de presion es necesario que pongas agua para que el vapor sea el que esterilice tus materiales y medios

Saludos