Cultivo in vitro

Nuevamente Gracias Acourtia... Conforme me acerco a hacer el intento in vitro Surgen más dudas... quizas la siguiente sea un poco tonta... pero ¿hay alguna diferencia entre usar azúcar blanca y azúcar morena?

 

La azúcar blanca está refinada y la morena no, por ello contiene más elementos naturales que la blanca, aunque está es sólo una suposición y sólo he utilizado la azúcar morena con los resultados que has visto en este post.

 

pues a manera de infomacion he usado el azucar blanca, y no he tenido problemas

 

Hola a todos, quiero decirles que hace como dos meses compré semillas de unas cinco especies de Nepenthes, todas fueron sembradas in vitro, tres se contaminaron y dos no. Hoy he notado la germinación de N. glabrata, sólo dos semillas de 20, es un porcentaje de germinación muy bajo pero germinación al fin, en unos días más subiré unas fotos del proceso.

También sembré semillas de cinco híbridos de Adenium, no son plantas carnívoras, todas las semillas germinaron en 5 a 10 días, les debo las fotos. nos vemos pronto

 

Enhorabuena Acourtia! Yo te cuento que por mi parte he hecho mis primeros intentos de in vitro con semillas de Drosera: peltata, glanduligera y Cephalotus y hasta ahora se ve excelente, ya va poco más de una semama y sin contaminación! Ahora me surge una duda, al frasco se le precipitan gotas de agua, las cuales se acumulan en el medio, no es mucha agua, serán un par de gotas cuando mucho, se las debería escurrir(por supuesto que en condiciones estériles)?

Saludos

 

Que gusto Pudin, pero cuenta los detalles del procedimiento de siembra de tus semillas, incluido si lo hiciste en una campana de flujo laminar o con una caja de acrílico.

Cuando preparas medio de cultivo es normal que haya agua de condensación, no la retires de los frascos, el agua se va consumiendo conforme pasa el tiempo.

 

Gracias por el dato Acourtia.
Ahora te cuento como hice, no use ni campana ni una caja de acrílico.
En una web de orquídeas encontré un método que me pareció sencillo y muy barato, consiste en usar una olla con agua hirviendo como área estéril, sé que ahora suena algo confuso pero ya explico, es simple, pones agua a hervir en una olla y encima una rejilla sobre la cual trabajas, al estar el agua emanando vapor esteril constantemente se puede considerar que toda la zona en la que haya vapor será esteril.

Tambien debo mencionar que no usé medio MS, en su lugar utilicé la solución nutriva que uso para mis cultivos hidropónicos, que si no mal recuerdo alguna vez mencionaste que por sus componentes tambien serviría.

Hasta ahora no ha germinado nada, pero esperemos que sea pronto para poder mostrar avances. Por cierto Acourtia, si no mal recuerdo has germinado semillas de Drosera peltata in vitro, dime, les diste algún tipo de tratamiento antes de la "siembra"? Me refiero a usar GA3 o darles una estratificación caliente(cosa que he leído se necesita para las tuberosas).

Te dejo el link de la web donde ví lo del vapor como área estéril:
http://www.orchideenvermehrung.at/cgi-local/framebreaker/reload.pl?english/nodes/in%20vitro/index.htm

Saludos

 

Me parece excelente que utilices un medio de cultivo diferente Pudin, los resultados serán interesantes y la información de la dirección está excelente !!!!!.

Con las semillas de tuberosas no he utilizado el ácido giberélico, sólo he esterilizado las semillas con clorox y germinan, tardan unos tres meses en hacerlo. La D. peltata la sembró Roberto en el curso de cultivo in vitro yahora tengo dos frascos con varias plantas, también tengo D. ramellosa y produce tubérculos in vitro.

 

Que tal Acourtia, nuevamente yo por aquí molestando... y cada vez más cerca de poder intentar el cultivo in vitro. y con algunas preguntas quizás algo tercas.

Eh logrado conseguir el medio de cultivo M 5519 a diferencia del M9274 veo que no tiene el agar Lo cual no veo como problema y al parecer la sacarosa que supongo que es el azúcar.
La pregunta es la siguiente, por las cantidades que veo que usas de azúcar realmente no necesitaría mas que conseguir el agar y poner la misma cantidad de azúcar que comentas o completar exactamente la cantidad en gramos que que tiene el m9274?

De antemano muchas gracias Acourtia, te comento que también ya ando en la compra de varias semillas de Carnívoras a ver cómo nos va con el experimento.
Saludos.

 

Muy bien Oscarrovira, si el medio M5519 no tiene sacarosa ni agar, por cada litro de medio(diluido 1:3) adiciona 30 g de sacarosa y 7 a 9 g de agar.

 

Si, el método del vapor es fácil y bueno, aunque es un tanto complicado trabajar en el área por todo el vapor quemandote las manos , pero bueno ya pronto compraré una caja de plástico para la "glovebox".

Que bueno que me dices que se tardan porque ya empezaba a preocuparme, pronto sembraré semillas de Drosera rotundifolia a ver que tal me va, estas necesitan estratificación pero tú que dices, las estratifico o no? estaba pensando en poner un frasco a estratificar y otro no a ver si hay diferencia


Saludos

 

Gracias Acourtia, ya ando de nuevo por aquí, con la buena novedad de que me cotizaron y si tienen el medio M9274 cuesta 100 pesos más, pero los 500gr de agar me costaban 3500 pesos! así que mejor 100 pesos más.

Pero en realidad lo que venía a consultarte sabiendo que eres perfectamente bien entendido de estos asuntos es lo siguiente:

Tengo una pequeña Dionaea que tiene una malformación aquí te dejo el link si gustas verla Dionaea Muscipula 3 trampas en una hoja La idea que tengo es quizás absurda pero estaba pensando si tomo la hoja de esa planta con malformación y hago esqueje en el medio, crees que se pueda pasar.. no sé si sean genes y tratar de "crear" una nueva especie o quizás mejor dicho variedad de Dionaeas con 3 Bocas?

Cómo siempre de antemano te agradezco y te envío saludos.

 

No lo se Pudin, pero bien puedes experimentar, puedes colocar frasco con semillas en el refrigerador uno o dos meses y ver los resultados.

Oscarovira aunque el medio M9274 ya tenga agar, como debes hacer una dilución 1:3, necesitarás adicionar 5 gramos de agar y 20 gramos de azúcar por litro de medio. Ahora los 500 g de agar Bioxon cuestan, a lo más, unos 1500 pesos, el que mencionas es muy caro, cotiza el agar bacteriológico, ya que existen varios tipos de agar, un sustituto excelente del agar es el Gelrite y no se si sea más económico.

Con respecto a la Dionaea, lo que quieres hacer es cortar la hoja de la planta, desinfectarla y colocarla in vitro. Esta tarea sólo la recomendaría si tuvieras un gran control de la contaminación, que viene junto con la hoja de la Dionaea, sin embargo, esto no impide que lo intentes.

 

Gracias Acourtia... y crees que si sea lo correcto para tratar de mantener la malformación?... es decir... quiero pensar que en esa hoja o esqueje, se encuentran mas células con el código genético que hizo la malformación. y que si en el medio de cultivo se puede proliferar más rápido que simplemente en sustrato, podría quizás irse repitiendo ese "patrón" genético. estaré en lo cierto o ando divagando mucho?


Gracias c

 

para mi divagas mucho

el problema de esas mutaciones es que son a nivel somatico (es decir que solo afecta a una pequeña poblacion de celulas de la planta). suponiendo que eres todo un experto en el cultivo de los tejidos vegetales (por que "limpiar" un tejido que ha estado en contacto con el ambiente y que salga vivo de este proceso es toda una proeza) necesitarias identificar las celulas que presentan esta mutacion (esto solo se puede con marcadores moleculares, asi que de entrada necesitas un laboratorio y bastante $$), y ademas correr con la suerte de que esta mutacion cayera en una zona meristematica, donde todavia puedas encontrar celulas indiferenciadas mutadas para que esta mutacion sea transmitible

asi que disfruta tu hojita mientras te dure mi buen