Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

hola Olivia
Que bueno q ya estas otra vez al frente del post, te platico q ya tengo mis frasquitos, hay van con muchisimas fallas en las semillas abiertas, pero no me quejo voy aprendiendo poco a poco, ya consigo semillas no tan facilmente y vainas o sea q por material no paro, hasta hice mi camara de flujo laminar, si quieres algunas semillas de especie mexicana vere si te la puedo conseguir
quedo a tus ordenes MAESTRA
Ramon

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Estimada Olivia tienes chispa y no dudo ni por un momento que si te lo propones en un tiempo ya estes cultivando meristemos adaptando lo que se te pare enfrente.
y si tienes razon los medios ya los venden preparados aun que hay que considerar que lo mejor es prepararlos uno mismo asi no son comerciales y te quedan mejor yo la verdad en lo que encuentro mayor grado de dificultad es tanto en la preparacion como en modo de usar los reguladores de crecimiento por que se usan en cantidades muy pequeñas tanto como diesmilesimas de gramo y las basculas para pesar esas cantidades son demasiado especializadas y por tanto caras.
por lo demas creo que no es muy dificil bueno me despido recibe un saludo cuidate.
Ruben

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Haciendo un curso de cultivo in vitro, trataron de enseñarme a aislar un meristemo, les comento que se nesecita mucho pulso y paciencia, es mucha la practica que hay que hacer, tener los ojos en un microscopio, en una mano manipular unas pinzas y en la otra un bisturí, y tratar que el meristemo no se salga del visor del microscopio, les cuento que dañe varios meristemos y no pude.
Se que por este metodo se ahorra todo el tiempo que tarda la semilla en madurar, y que es la unica manera de lograr plantas iguales a la madre.
Por lo pronto seguiré con mis medios, prepararé 2 más e iniciaré con la siembra ya les contaré.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Estoy apunto de preparar mi segunda remesa de botes.

En los anteriores, tras la siembra hace casi un mes, se ve en cinco líquido blanco (en uno se ven glóbulos verdes ¿?), en los otros cuatro no hay signos de cambio.
¿Algún consejo al preparar la mezcla platano-tomate? Estoy pensando en realizar la siembra en cuanto se enfrien un poco los botes. Por otro lado en los frascos ventilados la siembra debe ser más fácil porque con limpiar la hipodérmica y pinchar con cuidado el teflón debería valer ¿no?.

Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a todos,

Es genial ver el movimiento que hay por el post ahora. Un montón de pruebas y de éxitos. Espero ver más fotos...

Aincioa, lo siento no he utilizado nunca frascos ventilados. Los "glóbullos verdes" tienen toda la pinta de ser unas bonitas germinaciones. Felicidades.

Un saludo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Ayer preparé 14 botes que fueron por el fregadero.
Cuando estuve en china traje algo que yo creía que era agar en bolsa de kilo. Pues aún echándolo a lo bestia no llega a espesar la mezcla.

De la fórmula plátano-banana, el agar es lo que más caro me cuesta: 6€ / 20 gramos.

Ayer estuve pensando y pensando lo siguinte:
Si hago un agujerito en la tapa, lo tapo con una tirita y al meter el frasco a esterilizar al horno la unto en agua oxigenada, esterilizo la zona. Después la siembra sería más fácil porque con pasar la aguja de la hipodérmica con agua oxigenada y pinchar con cuidado la tirita a trvés del agujero de la tapa debería evitar la contaminación. Como final si tapo el agujero con cera, loctite o cinta aislante el bote quedaría sellado definitivamente. ¿Qué os parece?

Para siembra ¿es conveniente añadir carbón vegetal?
¿La capa de líquido blanquecina es normal?

Acabo de comprar en ebay semillas de ophyrs y dendros. Espero unos días para sembrar a que den la calefacción en casa para que todo esté más calentito, que ahora empieza a hacer frio.

Tengo que preparar más botes....

Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Niña: yo compro a precios de risa el agar en el Macro. Tambien lo pueden vender en tiendas de comida china, en el Corte Inglés o en tiendas de hierbas y demás productos naturales. En cuanto a lo blanco, a mí me salían y los tiraba. Parece que no afecta a las semillas, pero sí a lo largo del tiempo. Lo de las tiritas también lo quiero hacer yo. No sé si comprar algodón hidrófugo, que sería lo mejor, porque podrían salir hongos en las tiritas por la humedad. Si lo haces, en vez del agua oxigenada sería mejor que las empaparan con un fungicida.El carbón vegetal activado se usa para prevenir hongos, por lo que es bueno un gramo por litro. Las semillas de Ebay suelen ser no viables, las de ophrys necesitan un medio para terrestres. Si compraste a Kumpol con toda seguridad que no conseguirás que germinen. De ese distribuidos nunca lo conseguí yo. Un saludo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Estoy en contacto con phytotechlab para ver si merece la pena conseguir preparada la mezcla. Mi idea a medio plazo va más con los paphiopedilum que con otras orquídeas.

El precio de 10gramos a 3€ que acabo de comprar es en el Leclerc.
Esta noche voy a hacer frascos (unos 12 con un litro) a ver si me gelatinizan.

El tema de las tiritas lo probaré en dos botes a ver si no se contaminan. Digo de humedecer con agua oxigenada o alcohol sólo a la hora de sembrar con la hipodérmica. Mi idea es retirar y sellar el agujerito después justo de la siembra.
Una alternativa es papel de filtro de café y cinta aislante alrededor para fijarlo... El caso es que ha de aguantar así en el horno a unos 150ºC que es la temperatura a la que me empieza a hervir la mezcla, y a esa temperatura el pegamento de la cinta aislante se reblandece mucho.

Para que se mezcle el agar ha de hervir la mezcla así que hoy probaré a hervir el agua sola con el agar y luego añadir el resto, calentar un poco y a los botes. No tengo claro que al hervir no se descomponga la vitamina B. Lo que no sé es si pasar la mezcla por el colador ya que queda bastante pulpa, agar, etc, en el mismo y eso que para el tomate uso licuadora...

Mañana os cuento.

Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Loborios; Estoy comprando paphios a buenos precios a eco-sieben en ebay. Semillas de dendros de Tailandia a precios de risa que pienso mirar al microscopio antes de votar positivo.

Me temo que el algodón higrófugo sea más dícil de fijar. Cuando hablo de tiritas es de esas pequeñas y redondas, que pegan todo alrededor. El agujero de menos de un milímetro.

Ilusión no me falta.

Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Pues yo no lo veo tan claro....

El bote que sembré sólo esterilizando las semillas no se ven cambios. El que tuve 24 horas en agua azucarada y luego lo esterilicé es el que tiene una capa plana blanca y algo verde sucio en las paredes y una zona del fondo.

Pondré fotos pero no sé si se verá algo, yo casi no distingo nada.

Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Bueno abrá que esperar a ver.

No se si con las tiritas será suficiente, por lo que he leido, para que no pasen hongos, ni bacterias, usan filtros con agujeros de 22 micras.

Se pierde la mayoría de la vit b1 al calentarla, pero las fórmulas ya contemplan la pérdida.

Un saludo,

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Alguien podría subir fotos del proceso de desinfección de las semillas utilizando la jeringa. Tengo guardadas varias semillas maduras, y tengo dudas como es el procedimiento. Y una imagen vale por mil palabras. Gracias.
En relaciona a como evitar la contaminación en el agujero de la aguja, se me ocurre abrir un agujero del tamaño adecuado en donde entre a presión un tapón de los frasquitos de medicamentos. los tapones están diseñados para que sean perforados por la agujas hipodérmicas.

--

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola,

Sergio eres todo un mcguiver, es buena solucion lo de los tapones, aunque yo seguiré con la esterilización y siembra dentro de la caja.

Te dejo un enlace a ver si te sirve para lo de la jeringuilla

http://orquideoteca.blogspot.com/2009/06/esterilizacion-de-semillas-metodo.html

Un saludo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Muchas Gracias Monstera por el linck, es bastante explicativo. Se me a ocurrido otra idea. Tengo una jeringa que me me dieron de herencia, la jeringa es para ganado y utiliza agujas grandes. Espero que resulte. El día de ayer prepare unos tubos de ensayo, los tapones son bastante gruesos por lo que les barrene un poco para ayudar el paso de la aguja. Dejare en observacion una semana el medio por cualquier contaminación.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Bueno, ahora que por fin tengo un rato libre os cuento.

El agar que a mí me funciona vale 6€ los 10 gramos, me equivoqué al dar el precio anteriormente, no tengo carnet del Macro...

Al pasar por el colador el tomate licuado lo que cae es un líquido incoloro, ¿hay que usar la pulpa o solo ese líquido?

Las tiritas no han aguantado dentro del horno, al estar en contacto con la tapa metálica y bajo el papel de aluminio, algunas han desaparecido del todo, otras sólo ha quedado el centro. Lo de los tapones parece buena idea si es que no se derriten, y el problema es dónde encontrarlos.

Por fin la mezcla ha solidificado, un poco de más a mi modo de ver. Ahora toca esperar a ver si no se contaminan los botes. En casa ya me están preguntando a ver dónde voy con tanto bote... y es que mientras no den la calefacción no puedo guardarlos en un baúl que tengo junto a un radiador.

Mis paphios están a punto de florecer de nuevo y yo sin frascos utilizables.

Sergio, debería funcionar pero los tubos de ensayo son un poco pequeños para sembrar ¿no?

Saludos.