Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola,

Aincioa, creo que sería mejor para empezar escojer un metodo de preparación de frascos que haya dado resultados positivos a alguien y a partir de que lo domines le vayas haciendo los cambios que consideres. Te va a resultar más sencillo

Si quieres hacer frascos para pinchar directamente la aguja, necesitarás cinta o filtro que no deje pasar los hongos y bacterias (22 micras) y no tengo tan claro que puedas pinchar directamente sin caja, ni cámara de flujo u otros sistema parecido sin que se contamine.

Suerte,


PD hay que usar tb la pulpa, sólo hay que retirar las semillas, prueba un colador un poco más grande.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Los botes normales van bien sembrándolos al vapor. Otra cosa será que germine algo o no.

Por otro lado comentar que al licuar el tomate queda algo de líquido y si lo dejo reposar se separa en dos capas el solo: una que parece suero y otra que flota encima más espesa. Sin echar esta última creo me quedan los botes muy duros, tan es así que en los primeros botes que puse, la mezcla se está separando del tarro quedando bolsas de aire entre la mezcla y la pared.

Me queda pendiente para hoy subir alguna fotico del proceso.

De cara al siguiente intento de siembra: A la hora de esterilizar las semillas deduzco que el procedimiento es 24 horas en agua con azúcar (tanto volumen de azúcar como de semillas), en la jeringa 10 minutos en lejía de casa al 10% lavar con agua destilada a través de papel de filtro ¿así no se contaminan? y al frasco.

El cultivo a partir de meristemos parece similar al de las semillas pero con productos químicos más complejos. Luego hay que conseguir extraer los propios meristemos... que según leo producen protocormos al igual que las semillas. Estos se hacen picadillo para aumentar su número en la siguiente generación de nuevos protocormos.

P.D: Muchas gracias Olivia por seguir apareciendo por el foro.

Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Si yo ocupo 2 miligramos de BAP, es correcto hacer un litro de agua destilada con gramo de BAP, y luego con una jeringa saco 2ml, esos 2ml son equivalentes a los 2 miligramos?

Por cuanto tiempo debería mezclar para asegurarme que los gramos están bien disueltos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Depende de la concentración inicial de BAP. Inicialmente no creo que lo consigas puro ¿no?
Si es puro, 1 gramo más 1 kg (1litro) de agua te dará una disulución al 1% en peso. 2 gramos más 1 kg (1litro) de agua te dará una disulución al 2% en peso.

Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Disculpen la ignorancia, que es BAP?
en relación al calculo de 1 gr o 1 ml en un 1litro, el porcentaje es 0.1% ya que el litro tiene 1000 ml.
Los tapones de hule que utilice en los tubos de ensayo son los que utilizan en los laboratorios y soportaron la olla de presión.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Que dicha que me acordastes de eso!!!, lo había olvidado completamente.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

http://en.wikipedia.org/wiki/6-Benzylaminopurine

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Gracias por el linck,

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

HOLA MONT. YO USO EL METODO DE PINCHAR EN LA TAPA DEL FRASCO E INOCULAR LAS SEMILLAS EN EL MEDIO USO TAPONES DE GOMA Y LA AGUJA HAY QUE QUEMARLA EN EL MECHERO Y PONER ALCOHOL EN EL TAPON TAMBIEN USO FRASCOS CON TAPAS ROSCAS METALICAS EL REALIZO UN AGUJERITO PEQUEÑO POR AHI INOCULO HAY QUE TAPARLO CON CINTA DE CIRUGIA NI BIEN SE SACAN DE LA OLLA A PRESION LO HAGO EN CALIENTE OK DA RESULTADO

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

SERGIO YO USO ESAS AGUJAS PARA GANADO QUE SON DE CALIBRE GRUESO QUE PERMITEN PASAR LAS SEMILLAS ESTERILIZADAS AL PINCHAR EL TAPON DE GOMA ES COMO SI DIERAS UNA INYECCION SOLO TENES QUE USAR AGUA ESTERILIZADA Y TENER LAS JERINGAS TAMBIEN BIEN ESTERILIZADAS LA AGJA CADA VEZ QUE PINCHAS QUEMALA EN EL MECHERO PORQUE SI NO LO HACES SE TE CONTAMINA YA LO PROBE SUERTE OK

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

hola ancio
veo q has estdo sufriendo el comienzo de los cultivos in vitro
yo te recomendaria comprar de entrada los medios para cultivo q vende sigma elrich no se si se consigan por alla
pero puedes buscar en internet el medio ms o el knudson
y pase por tantos errores q ya empece a dominar, y por el otro lado la vaina verdes mucho mas facil de trabajar,
aun sigo intentando con semillas abiertas y el promedio es un 70 % de contaminacion.
les deseo a todos
frascos verdes (con protocormos)
ramon

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

http://www.sigmaaldrich.com/spain/contacte-con-nosotros.html
perdon es sigma aldrich
y tienen medios de cultivo preparados para orquideas
suerte

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

BAP es igual a Benzilaminopurina es un regulador de crecimiento y la cantidad que se usa no es al tanteo los reguladores tienen una funcion especifica.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola
Después de un tiempo de espera, muestro mi primer intento de cultivo in vitro.
De una vara floral obtuve 5 cortes cada uno con su respectiva yema a la cual le retire la piel que la cubre, el procedimiento de esterilización de las mismas fue: 5 segundos en 70% de alcohol 30% de agua pasándolas después por 15 minutos en : 90% agua 10% cloro, posteriormente lavando en 3 ocasiones con agua destilada estéril.

El medio de cultivo que utilice es:
1 litro de agua
7 gramos agar (en promedio, no tengo bascula)
1 ml de PPM
1 ml de BAP
30 gr de azucar
Y ajuste el ph en 5.7

Todo lo anterior lo puse al fuego hasta que el agar y azúcar se disolvieron. Vertí la cantidad de 3 ml del medio a cada frasco de cristal y luego esterilicé en el horno de microondas por 5 minutos cada uno, esperé 1 hora en promedio a que solidificara y quedaron listos para trabajar.
No tengo cámara estéril solo uso una caja de plástico como la de Monstera puesta de lado , abierta, esterilizada con cloro y para desinfectar las pinzas y bocas de frascos,uso una lata de alcohol sólido encendido ya que en teoría me da una protección 30 cm de diámetro de esterilidad, trabajando al abrir y cerrar los frascos casi encima de la flama del alcohol.

De los 5 frascos con sus corte de vara, 4 siguen creciendo, 1 de ellos la vara se secó a los pocos días.

Desgraciadamente no tengo fotos de los frascos recién hechos pero todo inició en julio 27.
estas 3 fotos es el avance de la misma vara al día de hoy




un frasco más y su avance



Uno más



y el ultimo



estas 3 fotos son del día de hoy pero ya no se cual es cada una de las plantas y no puede acomodarlas con las fotos de arriba, lo que si veo, es que al hacer el cambio de medio (por las oxidaciones fenólicas), el medio me quedó mas "flojo" y las varas cayeron, lo cual hizo que se multiplicaran y hay mas de un brote por tallo hoy vi por primera vez algo que parece ser una raíz pequeña esta próxima semana me toca hacer de nuevo cambio de medio.


Perdón pero se pegó mucho el plástico al frasco y no está clara la foto


y en esta creo ver una pequeña raíz


De nuevo perdón por extenderme tanto pero de esta manera explico lo que he hecho y mi agradecimiento a Monstera por todo lo que he aprendido de ella y sus técnicas, y animo a todos los que como yo estamos iniciándonos en esto maravilloso mundo del in vitro.

saludos

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

De perdón nada, es una auténtica pasada lo bien que se te da el invitro.

Saludos.