Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Gracias, aincioa.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a todos, he estado leyendo todo este tema del foro desde la 1º pagina y me he quedado en la pagina 20 porque me he cansado de tanto leer jaja , les cuento:
Me gustaría hacer mi primer cultivo invitro, tengo los materiales como son:

el glovebox casero = que el de mostera con sus guantes
agar agar(polvos)
medio de cultivo (polvos)
pinzas
Botes
etanol 70%
papel de filtro
vaso de precipitados
placas de petri
10 pipetas
papel medidor de ph
envudo

mis preguntas son las siguientes:
¿como esterilizo las semillas?
¿es necesario una holla a presion o se puede usar otro aparato?
¿el glovebox se esteriliza con lejia?¿y silo esterilizas con lejia cuando metas los utencilios dentro no se infecta al permanecer abierto?

Bueno espero me ayudeis a iniciarme en el cultivo invitro espero vuestra ayuda. Un saludo y felicidades a los que lo han conseguido

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Bebe de la fuente, ahí está toda la información:

http://www.orquideoteca.blogspot.com/

Si sigues teniendo dudas, pregunta. Somos todo buena voluntad.

Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

hola de nuevo a todos en especial a ti aincioa, por pasarme el link de ese blog tan bueno donde he aclarado muchisimas dudas, eso sí todavia me quedan algunas, aqui van las primeras que se me han presentado:

a ver los botes se meten en la olla para esterilizarlos con la tapa sin cerrar del todo de los botes pero dentro de los botes no debe haber nada estan vacios no?
Otra pregunta es una vez que los botes esten esterilizados y quisiera meter dentro el cultivo necesito hacerlo por ejemplo con el metodo de la vela, o el de la olla para crear un campo esterilizado?
Bueno espero entiendan mis preguntas y me respondas. Un saludoo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

BUENAS NOCHES
LOS FRASCOS CON LAS SEMILLAS DE ORQUIDEAS DEBEN DE QUEDAR BIEN TAPADOS OSEA QUE LAS SEMILLAS VIVEN SIN OXIGENO

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola Joselgg.
El medio tienes que prepararlo, te va a salir una especie de mazamorra (gelatinoso), luego viertes en cada frasco, 1 cm de altura (1/4 de un frasco).
Lo tapas, pero no lo ajustes, lo envuelves con papel aluminio, y llevarlo a la olla a presión. Si el frasco está bien cerrado con la presión hace boomm, por eso que la tapa debe estar suelta.
cuando termines con la olla a presión, al momento de sacarlo debes ajustar bien la tapa, de ahí no debe entrar en contacto con el aire, ya en la cámara bien esterilizada, se abrirá para colocar las semillas.
Aún así hay riesgo de contaminación.
Saludos de Perú.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a todos!
les contare una especie de trajica historia con mis cultivos
ya llevo 1 mes con los frascos, pero la primer semana todos los frascos de ser gelatina solida se convirtieron en agua excepto uno (d los mas chiquitos, lo bueno fue q por coincidencia tenia muchas semillitas ) y pues, pasaron los dias y ayer me di cuenta q el frasco se hacia agua!! y los minusculos protocormos (asi es, ya son puntitos verdes ) se estaban ahogando! , y pues yo sospechaba q tenia aalgo q ver el agar pues lo tenia desde hace masomenos 1 año y medio guardado... entonces por miedo a hacer otro cultivo con el mismo agar q tenia a la mano y q se estropiase, tube la loca idea de mojar algodon con humus liquido, ponerlo dentro de un frasco nuevo, ponerlo a herbir para ezterilisarlo esperar a q infriaze, y encima de una olla con agua caliente y ya vapor, pasar los protocormos de el frasco viejo a este con algodon en ese momento pense q como ya son protocormos fuera de la semilla, q ya se podian valer por si mismos sin necesidad de sustancias q los ayuden a salir de la semilla, ademas tambien imajine como serian en su medio natural, sobre ramas, y pense q lo unico q necesitaban era el hongo para abrir la semilla y d hay en adelante valerse por si mismas para crecer... cren q ise lo correcto?
saludos!

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

buenas!! tengo un cultivo in vitro de semillas de phalaenopsis tiene aproximadamente 15 días y aparentemente esta en buen estado. Mi pregunta es cuanto tiempo tardan las semillas en germinar y formar protocormos? espero su respuesta gracias!!!!!

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

holaa gracias manzano2008, me queda una ultima preguntita y creo que ya lo demas lo tengo todo controlado jaja.
a ver la camara (glovebox casero) para esterilizarlo que usais lejia?
frotais bien toda la camara por dentro junto con la tapa y los guantes imagino no?
y me pregunto yo a la hora de meter los frascos y todo el material no se contamina la camara al abrirlo???

Disculpen por ser pesado jaja pero quiero tener todo bien clarito antes de empezarr .
Gracias por la informacionesss

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Nada de pesado, creo que así aprendimos todos, más o menos.
Los frascos bien cerrados, las semillas, los materiales necesarios y todo lo que vas a utilizar deben estar en la caja, recién esterilizarmo, lo que hago es contar con 2 pulverizadores, uno para alcohol y otro para la lejía, yo empiezo con el alcohol, los pulverizo todo lo que veo, luego con el encendedor enciendo, se supone que con esto el olor a alcohol se acaba, luego pulverizo con lejía, con un paño seco todos los vestigios de lejía, recién hay que abrir los frascos, desinfectar las semillas, etc.
Saludos de Perú

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

hola Manzano, a ver si me aclaro que no te entendi yo bien, lo que hay que hacer es una vez esterilizados los botes junto a todo lo demas se mete dentro del glovebox y luego con la camara cerrada se pulveriza con alcohol y lejia, me querías decir eso no?
lo que pasa es que para limpiar bien dentro el glovebox una vez cerrado es bastante complicadoo acceder a todos los rincones que tiene...mediante los guantes, Por eso no se si te entendi bien
yo lo que me refiero es que cuando quieras meter el material dentro del glovebox al abrirlo no se contamina dentro?? yo de todas formas voy a lavarlo bien con lejia todo por dentro con la tapa destapadaa y limpiando la lavando la tapa tambien junto a los guantes previamente pero al abrirlo es lo que digo yo...
a ver si me podeis aclararrrr y que me entendais jaja. Saludosss

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Claro que se contamina la cámara al abrirla para meter el material, pero para eso has de desinfectar con alcohol una vez se empieza a trabajar dentro. Cuidado con lo del mechero, pues el alcohol puede prender y te quemarás las manos y los guantes. Yo tengo en las aberturas de la caja, donde han de estar los guates, cerradas con bolsas. Los guantes los uso como un material más, me los pongo dentro de la caja, sacados del papel de alumninio en el que se esterilizaron.

Las phale germinan entre los quince y los treinta días. Si las semillas no eran recién recolectadas puede que algo más. Saludos

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Veo que todas las cuestiones han sido respondidas así que sin más, animaros a que sigáis adelante y a postear vuestras experiencias.

Quizá lo que aún pueda quedar en el aire es que sí, hay que meter en la olla los frascos con el medio dentro y las tapas sólo han de presentarse, sin cerrar. Se cierran tras sacar los frascos de la olla.

La germinación depende de la temperatura de cultivo, la edad de las semillas, del grado de esterilización (que rompe las testas de las semillas) y en mi experiencia también de las horas de luz.

No uso glovebox de momento, pero no creo que sea muy sano mezclar lejía con alcohol, y mucho menos acercar una llama... a no ser que quieras un carajillo o una queimada. De todas maneras sé que todo lo necesario para trabajar en la caja ha de reposar dentro de esa caja tras haber sido esterilizado todo.

Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola ya estoy de nuevo por aquí, ya he realizado el medio de cultivo que monstera a puesto en su blog con tomate y platano y demas ingredientes, he seguido todos los pasos al pie de la letra, pero ahy algo que me preocupa, al sacar los botes de la olla es normal que el medio este liquido??
yo imagino que es = a cuando hacemos gelatina que en caliente es liquida y luego se pone expesa al meterlo en la nevera.
Bueno solo eso para que me lo aclareiss.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Actualizo el mensaje jajaj, ya me han cuajado todos los botes esto parece ir bastante bien lo proximo que no se contaminen jiji, por cierto si alguien tiene semillas de sobra me da = de que especie de orquidea sean porfa que me avisee para poder ponerlas a germinar ya que no tengo semillas... mandar MP porfaaa. Saludiness