Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola,

Dorgordul, las semillas no tienes que calentarlas.

Un saludo y bienvenido

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Bueno, ya está. 16 frascos inoculados con semillas. De todos los frascos había uno con una contaminación (moho tipo Aspergillus),



Los frascos llevaban una semana listos y bajo observación...

Después de separar las semillas del "algodón", las semillas pasan a la jeringuilla, para su lavado con H2O2,



prefiero por lo general sembrar de cápsulas verdes, pero como ésta se había abierto ya, no me quedaba otro remedio. Seguí el método descrito por Olivia en su fantástico blog, ver ahi.

Luego de sembrar hay que limpiar todo, y volver a anotar en cada frasco su número, el día de la siembra, el tipo de semilla...



Asi queda identificado cada frasco, en su ficha se podrá trazar su evolución desde la siembra hasta el deflasking - si es que hasta allí llegamos. ¡Venga, a desearme suerte!

Saludos
Arturo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

holaaa amigos de las orquideasss como estais , pronto tendreis una nueva compañera de esta aficion , madre mia ando leyendome todo el foro jajaj

bueno a ver si pronto empiezo con ello

Pd : intercambio semillas de phal , tengo un tema abierto sobre ello , por si a alguien le interesa intercambiar ,

gracias y saludos a todos

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a todos,

Arturo una consulta, ya que veo que te sabes los nombres de los hongos... a ver si me ilustras y me puedes decir qué es cuando el agua que hay sobre el medio se vuleve blanquinosa, siempre he pensado que era una bacteria, pero no tengo ni idea y no he sido capaz de encontrar información. Una vez encontré una web con fotos descripciones y nombres de hongos y bacterias, pero al tener que formatear el ordenador perdí algunas cosas entre ellas el enlace a esa web.

Un saludo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

¡¡¡¡Quieta ahi!!!!
No me sé los nombres de los hongos ... ni mucho menos, pero a grosso modo distingo los que p.ej. se forman sobre el pan (Aspergillus, Penicillium, ....formando cuerpos verdosos-azulados, hifas blancas y esporangios alzados con sus típicas cabecitas negras); pero poco mas. He tenido tambien esa capa blanquecina -¿líquida?- qu lentamente va cubriendo todo el medio, sin necesariamente matar a los protocormos - aunque a la larga siempre se mueren - y creo que es algo del grupo de la levadura -bacteria/hongo/loquesea. Eso por lo menos es lo que he leído hace tiempo en un foro alemán, y a mi me ocurre con más frecuencia cuando uso levadura madre al hacer el medio de siembra. Incluso después de la esterilización doble (dos veces seguidas en la olla a presión) había algunos frascos que desarrollaban esta 'mucosa'.

Como esto de las medios de siembra es genial para ver hongos distintos, igual deberíamos abrir un post con fotos de los hongos fructificando o tapizando el medio y presentarselo a algún 'mago de los hongos' en este foro... La verdad es que he tenido cosas espectaculares y de mucho colorido, desde blanco como en los quesos/embutidos hasta rojo-naranja... Hubiera preferido orquis, pero bueno...

Saludos
Arturo

Acabo de buscar en mis archivos viejos si tengo alguna foto, pero no las encuentro... buscaré y se encuentro algo, lo subo.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola Arturo,

Toda la razón algunos de los hongos son realmente coloridos, yo con el tiempo los he reducido bastante y prácticamente su incidencia es mínima, pero a la babilla blanca esta no le cojo el punto. Realmente tampoco es que salga mucho, pero si los hongos se que con cuidado e higine los controlo, esto no tengo ni idea de cómo sale ni de dónde.

A mi me da que es una bacteria y que es resistente a la esterilización a 121º.
Cuando siembro a veces me sale al segundo o tercer día y no en todos los frascos de la misma jeringuilla. Total que me tiene frita.
Lo he reducido mucho al descartar los frascos, antes los lavaba y los reutilizaba, pero ahora esos los tiro directamente.

Es cierto que no mata rápido y incluso algunas si son grandes inclino el frasco y las dejo hasta el repique en e frasco.

Me gusta la idea de hacer una recopilación de fotos de hongos, bacterias y diversos en el disco duro debo de tener unas cuantas.
Buscaré todas las que tenga y las colgaré en el blog (luego pongo un enlace o las cuelgo también aquí) no es que tenga problemas con colgarlo aquí, pero a veces la infoprmación queda sepultada por otros posts y informacióne sy luego no las encuentro.
Me encantaría que participaras y luego a ver si encontramos a alguien que nos los pueda identificar.

Que pena, no haberlo pensado antes, el otro día tiré uhn frasco que tenía un hongo verde botella y blanco con una capa de gotitas brillantes por encima precioso, parecía que estaba barnizado... Yo diría que el frasco no estaba bien cerrado.

Saludos

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Efectivamente,
esa capa blanca volvía cada vez en mas frascos, hasta que hice lo que tú, tiré una parte de los frascos y todas las tapas de enroscar. La olla a presión que uso yo era de mi madre y es muy vieja - de los años 50!! - ya no tiene ese chisme que mide la presión,, lo hago más o menos a ojo. Ejem, la uso porque me da mejores resultados que usar el horno y baño maria, y porque la olla es muy alta y puedo poner tres pisos!!! de frascos. La desventaja es que no sé la temperatura/presión real que alcanza.
Ya veré lo que resulta. Ya he comprado para la próxima cocción, ahora mismo lo que me faltan son frascos!!!
Me parece muy buena idea que lo pongas en tu blog. En este foro se pierde mucho bajo un montón de posts nuevos. Con gusto participaré.
Saludos
Arturo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a todos,

Arturo siempre me ha dado miedo poner varias capas de frascos, por que no sabía si se romperían, pones algo entre las tapas y los siguentes frascos? Ya se que es una pregunta tonta por que los de abajo tb tocan el metal... y no pasa nada, pero al no estar en contacto con el agua... y vamos que yo la olla la compré para esto y por lo demás no se como usarla

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola Olivia,
no creo que se rompan, te pongo unas fotos, para que veas el funcionamiento de esta olla a presión marca dinosaurio...



Como ves es bastante alta - le he puesto una botella de agua destilada de dos litros - cabe perfectamente - y consta de varias piezas. La más oscura es la base, tiene unas patitas que la elevan del suelo de la olla. (Me encanta esta vieja olla de aluminio con sus cierres y tapa de bakelita - en su día tuvo que ser el novamás!)



Llenando el fondo con unos dos cm de agua coloco la primera pieza y pongo los primeros frascos. A falta de frascos, ahora me toca usar los grandes...



Lleno el primer piso coloco la segunda pieza - esta no tiene patitas - para poner más frascos. Esta pieza se asienta sobre las tapas de los frascos y funciona sin problema.



LLeno el segundo piso y luego cierro la olla con su tapa y ya. Nunca se me ha roto algun frasco en la olla. eso si - siempre tienen que llevar o la tapa desenroscada o al agujero para la ventilación.

Saludos
Arturo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a todos. Quiero enseñarles un dendr. hercoglossum que tengo en un frasco in-vitro. Lo sembré en Abril 2011 y ha florecido dentro del frasco hace un par de días. Mide unos 7 cm de altura. ¿Lo puedo sacar ya del frasco para aclimatarlo, o me espero más tiempo hasta que los 3 nuevos brotes crezcan más?

¡ Espero que os guste !



Saludos

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

No sé si esto lo habrá mencionado alguien pero para el método de esterilización del medio también se puede usar el microondas. Yo lo hice hace unos años (esterilicé la mitad en la olla a presión y la otra mitad de los frascos en el microondas) para comprobar si funcionaba y por ahí tengo bastantes frascos de medio sin usar esterilizados con el microondas y hasta la fecha de hoy nada de contaminación.
La verdad es que es un método bastante rápico y mucho menos aparatoso que la olla a presión (personalmente siempre me han dado un poco de miedito las ollas a presión jaja)
El problema es que no recuerdo el tiempo y la potencia, pero lo tengo apuntado.
Si os interesa cuando vuelva a mi casa podría mirarlo y os lo comento.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

nogueras
se te olvido comentar q en el microondas no debe de llevar tapa de metal

olivia
yo meto tres pisos de frascos directamente lo que lo humedece es el vapor de agua que corre para todas partes dentro de la olla
nunca se me han reventado y he llegado a poner 45 frascos de papilla de bebe dentro de la olla

net piolin
espera hasta el calor mejor y si lo haces en zona esterilizada saca nada mas la planta grande

saludos a los nuevos y a los ya veteranos de aqui
ramon

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Claro claro orquicultor! ese detalle es muy importante si queréis seguir usando el microondas después jajaj
yo lo que hice fue ponerle papel film mientras se esterilizaba y con uno o dos agujeritos pinchados con un cuchullo para que pudiera salir el aire.
Nada más sacarlos les puse la tapa, y luego a la hora se sembrarlos los abrí en esterilidad y quité el plástico y ya está

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Esta interesante el tema de la contaminación de los medios en el proceso de vitro. Si Uds consideran que es una bacteria, tengo entendido que hay unas que aguantan altas temperaturas y que hay esporas de hongos que tiene una cubierta que las protege de altas temperaturas. Se me ocurre aplicar frio, como un proceso de pasteurización. No sé si funcione, podría ser después de prepara el medio y antes del llenado de los frascos. Para cuando se esterilice el medio y los frascos, estos no tengan bacterias que resisten el calor.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

LA temperatura máxima a la que puede aguantar cualquier forma de vida que pueda contaminar nuestros medios son los 121ºC, que es la temperatura a la que se esteriliza todo el material de laboratorio (corregidme si me equivoco pero creo recordar que era ésa) y yo imagino que el vapor de dentro de una olla a presión alcanzará esa temperatura.
En el microondas puede que no se alcance esa temperatura, pero en este caso lo que va a destruir a nuestras bacterias no es la temperatura, sino la radiación.
En cuanto a lo del frío según tengo entendido el frío no es capaz de matar a muchas bacterias, y en todo caso no puede destruir sus formas de resistencia (cápsulas, esporas, etc). En muchos casos lo único que hace el frío es que la bacteria entre en un estado de latencia del que sale al volver a tener una temperatura adecuada.

(vamos creo yo! ajajajaj)