Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola Nogueras,
¿y como has esterilizado las tapas metálicas de los frascos? La tapas y el borde de los frascos son la zona más delicada, ya que solemos agarrar los frascos por la tapa.
Como en mi cocina no hay microondas, no puedo comparar, pero resulta muy práctico la olla.
En cuanto a la temperatura máxima... Para efectos de esterilización y pasteurización de alimentos las temperaturas a alcanzar están bien definidas, pero en los frascos que yo he hecho incluyendo p.ej. polvo de ortiga, casi todos tuvieron infección de bacteria. Como sólo tengo la olla, hice una doble esterilización después de enfriar - sin gelatinar - e incluso así se infectaron algunos frascos. Lo mismo me pasé usando levadura; parece que algunas cepas son mucho mas resistentes y en el entorno ácido de la mezcla se encuentran muy bien.
El frío no funciona como desinfectante.

Saludos
Arturo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Las tapas las esterilicé con lejía si no recuerdo mal.
En cuanto a lo del polvo de ortiga y la levadura no entiendo muy bien a qué te refieres. Lo añadiste al medio? Esto es para controlar el crecimiento de contaminación? Lo añadiste antes de la esterilización no?
Quizás no mantuviste el tiempo suficiente los frascos en la olla o no alcanzó la temperatura adecuada.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Polvo de ortiga y levadura eran dos de los componentes con las que expermenté al hacer los medios de cultivo. Tuvieron el mismo tratamiento que los demás frascos, con resultados distintos.
Los frascos que he hecho hoy llevan remolacha....

Saludos
Arturo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Y lo añadiste antes de esterilizar y todo no?
La verdad es que no sé, quizás en algún momento tuviste algún fallo elaborando esos frascos. En principio si lo esterilizaste con el medio no debería haber ningún problema con que sea polvo de ortiga o levadura, porque lo matas todo.
Tiene que ser o que la esterilización no se haya dado en buenas condiciones (temperatura, tiempo de exposición) o que una vez esterilizados has cometido algún error y se te han contaminado.
La verdad es que no sé jeje

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

hola que tal estais , pronto ire empezando con esto del cultivo, pero solo me faltan la tiamina , y en las farmacias que he ido no tienen ,

pero en una de ellas me han dicho que tienen unas pastillas de vitaminas que llevan , la b1 , la b6 y la b12 ¿ servirian esas pastillas ?

gracias

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola dakota,
me asombra que no encuentres la b1 en la farmacia... es muy común. Si no cuesta mucho tambien puedes ponerle la otra.
Yo las suelo pulverizar en un mortero y luego de haber hecho la cocción, sin fuego y con la sopa enfriándose le incorporo la b1.
Suerte.
Nogueras, siempre sigo el mismo protocolo en la esterilización. Siempre que no use levadura me funciona, si hay alguna contaminación posterior, no es sistémica, aparece después de 7 días o más, etc. Las contaminaciones al usar levadura y ortiga en cambio fueros sistémicas. Asi que la única explicación que tengo es que hubo 'esporas' más resistentes ... descarto la posibilidad de que esa substancia blanquecina fuera un efecto de encimas, porque los frascos seguian virulentos incluso al reutilizarlos.
Pero da igual, como ahora ya no uso la levadura sino directamente la b1, ya ese problema no lo tengo.

Saludos
Arturo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

yo voy a ser franco compro los medios de cultivo y ya no le agrego nada ya ni agua de coco
lo q si lei por alli de alguien q le pone a un litro de agua 10 ml de cloro, hoy es la prueba x hacer
suerte a todos
ramon

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Bueno arturo pues ya no sé quémás decirte ajajaja
si al parecer el problema es la levadura pues niebla con ella! se utiliza otra cosa y ya está. A ver si este verano me vuelvo a animar con el in vitro. Lo hice hace dos años y fue un desastre, no hubo ni una contaminación, ahora, sólo me sobrevivió una plantita, que tengo en mi terrario como una reina!
Quiero animarme con las ophrys así que este verano probaré!

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Olivia lo de los hongos no es problema ni su identificacion creo que el problema es como evitarlos y en mi opinion o al menos para mi es mas problema el desenfrascado que la siembra como comentario te digo que de 700 plantas que desenfrasque el año pasado apenas me viven 40 todas las demas murieron y su crecimiento es muy lento no se compara con las reprodusco por bulbo.
y ahorita tengo otras cuantas que compre en las que estoy cambiando el protocolo que segui la vez pasada a ver si resulta en esta ocasion.
de los hongos te recomiendo un libro de fitopatologia que es de la editorial Limusa y de george n. agrios es mucho muy entendible y probablemente te aclare muchas de las dudas que manifiestas en lo que respecta al microondas venden unas tapas de plastico

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a todos,


Uff cuántos post en tan poco tiempo, me encanta tanta actividad. A ver si recuerdo todo lo que quería decir mientras los leía...

Ah, remolacha... por un momento creí que eran de frambuesa, qué color más apetecible

Yo nunca he usado levadura y ese "lo que sea, blanco" llego a mi vida. Realmente su incidencia no es mucha, digamos que con un buen protocolo se contaminan alrededor de 1% de los frascos, muchas veces por defecto del continente, que si estás al caso, al sacarlos de la olla "se oyen" los que están mal cerrados por que silvan o burbujean. Son cosas que pasan al aprovechar los frascos de conservas.
Tirando los frascos en los que sale el líquido blanco y no reusándolos queda bastante controlado. También compré PPM pero la verdad aún no lo he usado.

La verdad es que el mundo de las bacterias y los hongos es muy interesante, el otro día estuve leyendo de los microorganismos extremófilos... increible!

A desenfrascar hay que cogerle el punto, yo cada vez que saco una especie nueva tengo algunas pérdidas, lo que hago es poner unas cuantas de cada manera, en corcho, maceta, directamente a la intenperie, en tupper... y ver cual va mejor. Realmente no se la s puede tratar a todas igual. Las Catts, las phals y los dendros, son fantásticas para desenfarscar sin problemas. Los Oncidiums me han dado más guerra, pero lo fundamental es que no cunda el pánico, por que empiezan a perder las hojas al momento y no pasarse con el agua.

Bueno, yo también voy a probar de añadir la lejía al medio a ver que pasa, también he probado con unos frascos de polipropileno a ver que pasa. Aunque la verdad el plástico me da bastante grima y me gusta más el vidrio, pero ocupa muchísimo y es bastante más caro.

La B1 pídela por BERNERVA que es el nombre más comercial.

Saludos

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Desde luego no es lo que uno se imagina después de esperar seis meses y tenerlo todo preparado - me hace recordar aquella pregunta aqui en el foro de "¿cuántos frascos puedo llenar con una cápsula de semillas de orquídea?" ...



Pues chico, estaba todo a punto y zasss resultó que no hay ni una semillas viable... Doritaenopsis Purple Gem X Phal. equestris aurea. Me da que la aurea es 4N.

Mala suerte, pero todo un clásico ¿no?

Saludos
Arturo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Qué pena, a mi tb me ha pasado alguna vez y es todo un chasco

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Bueno, ya que hablais de contaminación, me apunto:

El 14 probé mi primera siembra invitro por el método del vapor. de 7 frascos, 5 ya tienen signos evidentes de contaminación....








Cosas que han podido ir mal:
- Cerré los potes demaseado, con lo que al abrirlos, entro aire a presión para adentro...
- Los potes son muy anchos, creo que eso mutiplica exponencialmente la posible contaminación.
- Uno que es novato, y que ha sido el primer intento....


Para las siguientes pruebas, me he hecho con un equipo más moderno...a ver si bajamos la tasa de contaminación....

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

¡Qué bien! Ya somos muchos...
Es normal que se den contaminaciones... Poco a poco le cogerás el truco
- ventanas cerradas;
- puerta cerrada,
- si respiras fuerte usa un protector,
- trabaja de derecha a izquierda - si eres diestro y viceversa,
- no pases con la mano (cara, pelo) por encima del frasco
- la tapa del frasco siempre bocaabajo, reposarla sobre paño o algodón empapado de desinfectante
- movimientos lentos "a camara lenta",
- cerrar el frasco y apartar a la izquierda (si eres diestro/viceversa),...
- una llama cerca para pasar por ella la herramienta utilizada después de CADA acción,
- la rejilla la pondría más baja de lo que la veo en la foto...

Y mira - después de tanto tiempo he vuelto a llenar frascos y ya hay 5 contaminados!! Estoy intentando salvarlos, ya pondré fotos en los próximos días.

Ánimo y suerte

Arturo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

En esto sí que puedo ayudar un poco:

Para sembrar en vapor, hemos de poner una cazuela muy grande al fuego, tipo hiervebiberones, con 8-10cm de agua y tapada. Esperar a que hierva y levante la tapa con el vapor.
Este vapor son microgotas de agua que sale del agua hirviendo, sin convección de aire, con lo cual es bastante estéril.
El hierro-rejilla ese del microondas ha de estar dentro de la cazuela.
Mientras se calienta el agua proceder a esterilizar las semillas y la jeringa con el método descrito por Olivia.
Cuando estén esterilizadas abrir la tapa de la cazuela en ebullición (esperar uno segundos antes de meter la mano mientras sale la bocanada de vapor, para evitar quemaduras).
Introducir el frasco en la cazuela sobre la rejilla.
Abrir un poco la tapa del frasco, introducir la punta de la jeringa entre frasco y tapa y presionar suavemente para que las semillas no vayan contra las paredes del frasco y rápidamente colocar la tapa del frasco.
Si se van a sembrar más frascos con la misma jeringa, dejar esta sobre la rejilla y proceder inmediatamente con el siguiente frasco.

He tenido muy pocos frascos contaminados y siempre por errores en la coordinación de los movimientos (dejar el frasco abierto fuera o la jeringa en la encimera...)

Saludos.