Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Gracias, Eliseotesón, por tu comentario. Un cordial saludo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Eliseo, excelente aporte, muy útil en verdad. Gracias.

Loborios: Desafortunadamente las semillas si las tienes en un medio no controlado a lo máxímo duran viables de 4 a 6 meses más o menos. Se reduce el tiempo de viabilidad especialmente si el ambiente es húmedo.
Si se guardan en el refrigerador en ampolleta de vidrio al vacío, pueden durar entre 3 a 4 años.

Arcangell, ¿Cuanto fue tu inversión (en Dólares) para construir tu campana de flujo laminar?

¿Tu campana también tiene lámpara UV?

Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra




gerardin te interesa algo asi? le habia puesto foco u v pero parece que mata las semillas

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Bonita y sencilla cabina... felicitaciones.
Compañero, el UV es precisamente para matar todo ser viviente...
Se trata de encender el UV unas horas antes de empezar a trabajar (sin las semillas ni plantulas dentro de la cabina).
Dado que tu cabina tiene paredes de cristal recomiendo precaución cuando esté encendido para evitar exposición.
Saludos!

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra



Segui las instrucciones de un manual que encontre y me e fabricado este para intentar el invitro.
los medios no se contamina nunca en la esterilizacion, pero si al volver a abrirlo.
hice un medio para probar con hojas pues semillas no e podido conseguir, son dificiles de allar, los de ebay no mandan a mi pais. Quizas el problema esta en el agua que no esta esterilizada al 100% pues no me salen hongos, si no bacterias se comen el medio de cultivo.

Que opinais de mi camara? no es la gran cosa pero le hice bastantes modificaciones respecto al manual.

Si alguno tiene semillas de sus orquideas que les sobren , gustoso las recibo.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Uff, voy a tener que leer mucho para ponerme al día. Hay muchas cosas interesantes a comentar.

Si me permitis iré haciendo citas, para no perderme.

Saludos a todos

Olivia

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola, estoy deacuerdo con tigo en casi todo, pero en cuanto a los 4gr de agar por litro, dependen del tipo de agar y lo refinado que esté, del que uso yo en tiras ( evidentemente no es de laoratorio) require de hasta 7 -8 gr por litro dependiendo de la fase, en este agar, con 4gr las plantas se hunden. Tengo un amigo en Uruguay que trabaja en una laboratorio, él usaba hasta 10 gr sin que le quedara duro, evidentemente su agar y el mio no eran iguales. Con 10 gr el mio se puede usar de arma arrojadiza...

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola, yo ajusto con ácidos comprados en un growshop y el ph resulta muy estable.

Saludos

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Está excelente la cabina. el diseño me parece muy bueno. Yo te recomendaría sellar los cortes frontales de la madera porque al mojarse con el clorox o lo que uses para esterilizarla se va estropeando.

No entiendo bien tu problema con la contaminación... si se contaminan cuando los abres el problema no es del agua sino de contaminación inducida al manipularlos.

Saludos!
Eliseo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola Monstera, Otro factor muy importante que se suele olvidar, aparte de la calidad del agar es las veces que lo gelificamos.
Yo antes hacía lotes de 10L de medio, eso me obligaba a pasarlos por el autoclave en 2 o 3 tandas. Entonces me dí cuenta que en los frascos que no solidificaron antes de meterlos en el autoclave la consistencia del medio era mucho mayor que en los que soidificaban y se refundían de nuevo en el autoclave... El agar que yo uso es esecífico para cultivo de tejido y permite usarse hasta un poco menos de 4g/l manteniendo consistencia suficiente para soportar las plantulas. Con agar alimentario es otro cuento y requiere más del doble como muy bien dices.
Saludos!

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Gracias Orquicultor. La única duda que tengo es ¿Qué tipo de filtro tienes bajo el ventilador?

He visto algunas campanas con filtros desde los automotrices, pasando hasta por filtros de algodón, en verdad muy ingeniosas e increiblemente funcionan a la perfección.

Yo sigo utilizando el método 'anticuado' de la lámpara de alcohol y una simple servilleta empapada en cloro encima de mi mesa de trabajo. De hecho ya me acostumbré a mi método ya refinado debido a varios años de contínuo trabajo y mejoramiento de la técnica y considero lo hago relativamente rápido y como hice un comentario anteriormente, hoy día tengo cero contaminación en el 99.9% de de los casos.
Cuando cambie a medios líquidos y comience el cultivo de tejidos, forzozamente necesitaré al menos una caja estéril.

Monstera, tienes toda la razón.
Un detalle extra que a veces pasamos por alto, es el costo final de un producto.
Se comenta el costo del agar de Phytotechlab en $138USD por kilo, lo cierto es que el costo real es mayor, ya que omiten los costos de importación, aunque sea por un rango de un 30-35% extra (o mayor) del precio base.

Además la mayoría de los que posteamos mensajes en el foro díficilmente llegamos a comprar más de 100gr de agar para nuestras pruebas-pasatiempo y peor aún en calidad de pureza para laboratorio. Debe haber algunos además de Eliseo que compren ésta calidad, no lo dudo, pero en su mayoría somos aficionados, no somos cultivadores comerciales .

Y bueno, algunas pruebas que yo he realizado:

Esta es una Barkeria melanocaulon, sembrada en 6gr/L de carragenina en medio mejorado comparado a la fórmula del Hyponex. Las semillas en las paredes del frasco, son semillas infertiles.
En esa cantidad de gel el medio queda como gelatina muy aguada, pero las plantas crecen muy bien (este frasco ya pasó a un medio más solido en su replante). Para siembra de semillas utilizo 8gr/L. Claro que ésta concentración es para el producto que yo compro que puede diferir a la calidad y costo del que se consigue en otros lugares.




La siguiente imagen tiene distintos medios de cultivo y distintos gelificantes, cada uno con sus ventajas y desventajas que ya he probado.

El frasco con medio amarillento, contiene híbridos que en sus genes tiene Lc Guadalupana y que acaban de salir de la colchicina y replantados a éste medio de regeneración mejorado con diversos aditivos naturales añadidos al medio.
Ahora a esperar los resultados que generó la colchicina.



La siguiente es una comparación de una Cattleya sembrada en 18gr/L de agar que me obsequiaron un mes atrás (derecha), en donde las plantas no recibieron los nutrientes de forma adecuada y a la izquierda, parte de esas Cattleyas replantadas con mi receta secreta. Notese el verde intenso e incremento en el desarrollo debido a una mejora en la liberación de nutrientes.




Otro frasco del mismo replante. No agar, no carragenina, no grenetina, no harinas. Mi receta secreta con un costo de $10 USD por kilo de gelificante. Las plantas necesitarán por lo menos 2 replantes adicionales para mejorar el crecimiento, no por culpa del gelificante, si no por el escaso desarrollo que tuvieron.




El único problema que he encontrado en la concentración de cualquier gel que he probado (Phytagel, bactoagar, agar, carragenina, etc.) es cuando el medio es demasiado duro (demasiado gel) o cuando las plantas pasan de un medio duro a uno más blando, donde algunas veces se 'vitrifican'. Utilizo luz solar, no luz artificial y esto acentúa el problema, también el mismo problema ocurre debido a la baja concentración de azúcares en el medio, pero a pesar de ello el problema no es tan grave, ya que se vitrifican cuando mucho de 2 a 3 plántulas por frasco.




Saludos

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

el filtro que ocupo es un hepa de 99.97 de filtracion me ha dado buenisimos resultados, pero tengo que hacer modificaciones ya q he estado muy debil y tengo que hacer una camara en la que pueda trabajar en este vicio de las orquideas, que a la vez paso a ser mi terapia ocupacional,
por si alguien se anima la vendo en 8,000 pesos mexicanos

 

Ese filtro es un H14 creo. yo encontré un H13 y de secundario puse solo un filtro corriente de fibra y laminas de filtro de cocina.
Intente hacer una buena cámara de flujo laminar, pero nadie comento ni siquiera el color. Esto se no ser popular y solo
Un principiante y no poseer orquídeas mas allá de unas phalaenopsis y unos cymbidium me hacen sentir ignorado.

Monstera o jeraldin: si los frascos están bien cellados , el poner film transparente a los frascos qué beneficios nos da? Es por las esporas de hongos o bacterias. en algunas fotos los veo puesto y en otras fotos no tienen film. Espero me ayuden con esta duda enorme.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Jóven, no se sienta así. Seguramente no siguió todos los mensajes....

Arriba yo pregunté sobre tu cámara y no recibí contestación.
Tus aportaciones son muy valiosas, evitemos malos entendidos.

Me gustó tu cámara y por eso pregunté un detalle, quieron construir una porque facilitaria enormemente el cultivo de tejidos y el manejo de medios líquidos.

Entre más funcional y económica sea la cámara, mucho mejor.

Yo no uso tapas en los frascos, sólo papel aluminio y después el film.
Esto ayuda a:
- Evitar la rápida evaporación del agua, porque el frasco no tiene sellado hermético (en mi caso).
- Evita la fácil entrada de microorganismos por la libre entrada de aire al frasco.

Saludos

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Leo todos los post y se me escapó esa pregunta. En dolares si considero el aparato sin las luces el costo en dolares es de aproximadamente 350 dolares segun los costos aca en chile por los costos de envio que todo viene de EEUU. Quizás como estas mas cerca los costos sean menores. mándame tu correo por interno y te mando el manual modificado con las medidas. el extractor que se considera es de 280 metros cúbicos por hora pero yo encontré solo uno de 300.

Los tubos fluorescente ya los tenia así que solo los puse. la luz UV también la tenia, aun que me dijeron debería haber puesto abajo... perocomo abajo se limpia con leguia por estar mas al descubierto la deje arriba donde dejo los materiales.

El vidrio lo corte de unos qeu me sobraron y puse uno abajo ya que la melamina se desgasta con el tiempo y es mas fácil de reemplazar el vidrio de abajo y el de arriba es para evitar turbulencias y el flujo de aire sea mas directo.