Siembra y germinación de orquídeas in-vitro

Si tienes de sobra te lo agradecerìa muchisimo, de verdad

 

Hola a todos!!!!
me decidí reiniciar mis incursiones in vitro... y les diré que el pasado día 12 de marzo monté una tanda de unos 15 frascos entre potes plásticos y de cristal... me fui por la opción del medio del plátano + tomate... y hasta el sábado pasado (una semana después) estaban limpios sanitos de cualquier contaminación, por lo cual me hice de semillas de Cyrtopodium punctatum gracias al jardín de un primo mío, de esta orqui no poseo en casa ejemplares así que me sirve con dos propósitos lograr in vitro y hacerme de plantas de esta variedad.... como no he logrado construir la cámara estéril estática usé en su lugar una pecera antigua a la cual le acoplé un frente de plástico con dos aberturas para los brazos y guantes... me fue incómodo trabajar con los guantes y como he visto cámaras estériles que son abiertas al frente parcialmente opté por trabajar con el plástico puesto pero sin guantes... ya había plantado en unos tres frascos previos que usé como prueba unas cápsulas de laelia rubescens de mi colección y aún se ven limpios los frascos... en el caso del cyrtopodium me fui por dos variantes en una usé el método de la jeringuilla con el algodón y en otro los sobrecitos de papel de filtro...
bueno no les robo más tiempo y les muestro mejor:

1 y 2) Pomos previamente fregados con agua, detergente y lejía comercial. Aún no habían pasado por la olla a esterilizarlos en baño de maría que fue su segunda limpieza. Los coloqué vacíos con las tapas semicerradas en olla normales al vapor por espacio de 20 minutos tras alcanzar el punto de ebullición el agua. tras hacer el medio, aún en la candela les coloqué dentro el medio de cultivo con lo cual busqué evitar esporas y que el vapor del agua evitara contaminaciones al destaparlos para colocarles el medio. Esperé 7 días y solo dos potes plásticos los cuales no pude colocar en la olla al vapor fueron contaminados.




3 y 4) Pomos com medios de Cultivo ya dentro y útiles empleados.




5 y 6) Cámara estéril improvisada con pecera la cual se lavo con agua lejía y luego con alcohol al 70 %.




7, 8, 9 y 10) Sobres con semillas, jeringuillas con semillas.






11 y 12) frascos ya sembrados y etiquetados.



13, 14 y 15) Algunas cápsulas de las orquis que he polinizado en casa.

Cattleya lueddemanniana a las cuales les puse polen de epidendrums:




Epidendrum nocturnum



Spathoglottis



Ahora a cruzar los dedos para que me germinen!!!! jejejejeje...
Ah y me perdonan los que sean conservasionistas pero cada vez que polinizo cojo polen de plantas diferentes e incluso de especies diferentes así que veremos que salen de acá:....!!!!

 

Muy bien Mike,ya nos iras contando los progresos de tu siembra y que tengas mucha suerte,saludos!

 

bueno carlos, la verdad monte dos variantes una con los sobre de papel lo cual me llevé una decepcion total pues de 9 ya ayer habian 5 contaminados, al parecer no logre descontaminar bien las semillas por este método y el método de la jeringuilla monte sólo 4 frascos creyendo que este me saldría mal y de esos 4 aún ninguno muestra señales de contaminación, así que me ire a partir de ahora para cápsulas abierta con el método de la jeringuilla te dire que de las cápsulas de laelia rubescens que sembré de cápsulas aún cerradas pues llevan ya una semana y media y no se han contaminado y veo algo de engrosamiento en semillas de un frasco
ayer saque los frascos con hongos y los lave, hoy los dejare otra vez con agua con lejia toda la noche para mañana hervirlos y volver a hacer medio porque tengo como 10 cápsulas de spathogllotis ya creciendo casí listas 5 para sembrar y como las he ido cruzando unas con otras no quiero que se me maduren sin tener frascos con medios montados
y yo con lo contento que estaba que una semana de hecho el medio de cultivo y no se me habían contaminado y en la siembra de las semillas se me fastidió!!!! grrrrrr
que decepción!!!!

 

Hola @mike34 yo hace muy poco comencé con el in vitro, pero he encontrado que el método de la jeringuilla funciona muy bien y es sencillo de llevar a cabo.

Otra cosa que también he hecho es limpiar bien los frascos con lejía y luego alcohol por fuera antes de sembrarlos. Sobre todo si ya tienen unos días de haberlos preparado como en tu caso. Por muy bien que los guardemos siempre algo de polvo pueden pillar y eso ser vía de contaminación a la hora de abrirlos para sembrar.

A mi no se han contaminado y los uso al otro día de esterilizarlos.

Mucha suerte!!

 

Yo tambien uso siempre el método de la jeringuilla para semilla seca,para mi es mejor y se desperdician menos semillas,mike no creo que haga falta desinfectar tanto los frascos,yo los meto en el lavavajillas y ya esta,la contaminación se produce mas al manipularlos para sembrar o repicar,hay que tener sumo cuidado de donde dejas la tapa,las pinzas y donde tocas con las manos o guantes.

 

hola Orquicarlos y Marqdiego, gracias a ambos por los comentarios y apoyo...
orquicarlos: ¿te refieres al lavavajillas que friega y esteriliza al vapor?? aca de esos en mi pais ni soñarlo, lo conozco de cuando estuve en canada que es un sueño a la hora de fregar los cubiertos de la cena eran automaticos con agua caliente que maravilla jajajaja, man aca en mi pais a fregar a pura mano!!! bueno claro con lejias cloro y detergentes liquidos o en polvo... en el caso de mis frascos como han sido frascos re-super-extra-multi reciclados los friego asi poniendolos en remojo con agua y lejia y detergente por una noche, los friego a la mañana siguiente dandole cepillos tanto al frasco por dentro y por fuera y a las tapas, los coloco al sol (dejenme decirles que el sol de Cuba, 12 del día, QUEMA!!!!!!) asi que ese calor natural ya va matando algunas esporas que hayan escapado al cloro, y luego baño de maria semitapados o sea la tapa puesta y no cerrada del todo y un asi lo destapo cuando hayan hervido 15 minutos y coloco el medio con una jeringuilla con los frascos aun en baño de maria, asi logre ya que no se me contamine el medio. el problema fue en la siembra esta ocasion... tome la pecera que uso como camara y el frente plastico los lave bien, los limpie con abundante cloro y luego gasa con alcohol, asi que imagino la camara no haya sido, emplee una capsula de semillas ya abiertas de cyrtopodium punctatum que habian sido picoteada por aves con lo cual supongo ya venian algo contaminadas del medio externo... una parte la use con el metodo de la jeringuilla (exito 50 % dos frascos de 4 estan viables y se ven con aspecto bueno las semillas y sin contaminarse) y el resto que emplee el metodo del sobre de papel de filtro fue un fiasco TOTAL...
ayer sembre con el metodo de la jeringuilla dos frascos con una spathoglottis híbrida que la capsula abrio y uno con laelia rubescens, este ultimo la verdad la capsula la vi medio secona y las semillas no muy buen aspecto asi que no le tengo muchas esperanzas a la laelia, aunque ya si tenia previo dos frascos con semillas de laelia que vienen bien...
en casa tengo como 15 frutos con semillas de spathoglottis, ya descubri que de los epidendrum polinice dos, así como logre polinizar una leochilus labiatus y una prosthechea cochleata, y de la cattleya cruzando con epidendrym radicans, ibaguanence, leochilus y anceps todas las cattleyas que polinice asi ya vienen formando los frutos... ahora tento una explosion de semillas asi que tengo que eliminar los errores en la siembra... asi que si pudiera hacerles llegar tengo semillas dentro de poco en cantidades...
aca hay tambien semillas en casa de una bletia purpurea, y ayer polinice todas las flores de un dendrobium superbum blanco...
ah algo que me da duda, yo coloco los frascos sembrados en otra pecera hasta tanto construya la camara de germinacion que ya tengo en proceso y medio resueltos los materiales, con una lampara de 20 Watts de las que conocemos como luz fria en mi pais... a una distancia de 15 -20 cm de los frascos, he leido mas menos que esos son los requisitos... pero mi duda es si poner dos lamparas a cada lado de la pecera que como la pecera no refleja como en las camara de germinacion con papel refractante... que me dicen??? que me aconsejan???

 

He tratado con los vapores dejando el algodón por más de 8 horas y no solo mató a los hongos sino a las semillas también, de las miles que puse solo unas 10 sobrevivieron en ese momento.
Quiero probar ese método en un medio de soporte sin agar. También leí que 1.75ml de peróxido de hidrógeno por litro de medio de cultivo desinfecta bien y no mata a las semillas, se pueden combinar ambos métodos si no queremos tener que usar autoclaves y cámaras de flujo.

 

Buenas a todos,

El otro día me encontré con Jara en Estepona y me picó el gusanillo de pasarme por aquí. Ya veo que os va muy bien y que estais a tope sembrando.

Un saludo,

Olivia

 

Pero que ven mis ojos!!! Olivia por aqui,como recordabas la contraseña??? ,es un placer verte de nuevo por aqui!

 

Bienvenida de nuevo

 

Jajaja, que bueno Carlos jaja.

 

Jajajaja, quien dijo que la recordaba.... he tenido que pedir una nueva

A ver que busque una foto, para no hacer un off topic...



Un saludo

 

Pero cuantossss
Yo llevo desde ayer repicando cosas y todavia no he acabado jajaja acabo de preparar medio .no paro jejeje

 

El armario de cultivo llenito