Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Tema en 'Cultivo in vitro de orquídeas' comenzado por Monstera, 3/4/08.

  1. CARLOS_H

    CARLOS_H

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra


    Un Mililitro = un Centimetro cubico
    La jeringa que uso es de 10 Ml dejo aprox 7 MIlilitros asi le tocan a aprox 9 frascos de 1/2 a 1 Ml por frasco la cantidad es aproximada, pero debes revolver bien el contenido es decir darle vueltas a la jeringa pues las semillas estan en el agua y tienden a asentarse.
    El primer comentario respecto a que una capsula engorda pero no tiene semillas o las semillas son esteriles . . . .
    Es un poquito aventurado afirmar algo asi, pues para decir no tiene semillas deberia llegar a la madures ( comienza a secarse y abrirse) y al sacudirla no saldria ni una sola . . . ok esa no tiene semillas. A Mi no me toco ni una sola verla asi. Y el comentario de semillas esteriles, ya hasta un microscopio compre y para poder afirmar que son esteriles las semillas 1- deberia ver semillas sin nucleo o 2.- al usar la misma capsula con diferentes formulas o variaciones en ingredientes y cantidades. Todas todas estarian sin germinar y al fin se podria decir= SON ESTERILES
    Cada vez que una formula falla, siempre se culpa a las semillas, nunca a que se pasaron de Lejia, o a que los tomates eran cultivados en una tierra sobreexplotada y de escasos nutrientes, o que al 1 gr de abono o fertilizante de falta un mineral que va en partes por millon y si no lo tiene jamas, jamas veran iniciar la fotosintesis, la semilla se hidrata y sale una ligera punta pero jamas jamas desarrolla ( Yo observo con lentes de aumento bastante grandes)
    Estimados Srs y Damas no tengo hay interes en contradecir a ninguna persona, sino el afan de querer tener el mejor resultado.
    Para nosotros esa es la satisfaccion ;)
     
  2. Alancitop

    Alancitop

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola Carlos¡¡

    Bueno y ya abusando de confianza jajajaja¡¡¡ cuanto tiempo esterilizas tus semillas???

    Respecto a CONTRADICCIONES¡¡¡ Para nada que contradigas, al contrario, es bueno recibir criticas y experiencias, ese es el fin del post para aprender y adquirir nuevas experiencias y conceptos. Lo que escribi, solo fue una breve experiencia, pues me ha tocado que las capsulas engorden, y cuando maduran, se abren y no hay nada de nada, ni un polvillo :94congelado: para hacer ni un frasquito. otra ocacion me paso que aborto la capsula, en otra paso que cuando las puse a hidratar y despues de hacer vacio, jamas dejaron de flotar y al llevarlas con un amigo que trabaja en un laboratotio, observamos que solo eran testas y solo unas de cientos, tenian nucleo engordado, pero al ser diminutas, en el agua ni se distinguian, y el 95% de la capsula, resulto esteril.

    Otra, tambien he probado diferentes medios de cultivo, y por lo regular yo meto todas las semillas de un junto a una sola jeringa, siembro en 3 tipos de medios de cultivo, y todos me dan dferentes resultados, pues en el de abono 20-20-20, germinan bastantes pero crecen muy muy lentas, en medio de tomate y banana, germinan pocas pero crecen mas rapido, y en abono 30-10-20, germinan poco y crecen poco.

    Y bueno esto es asi, no hay una sola regla que te garantice el exito, pues implica demasiados factores que a veces se nos van de las manos o a veces esta en manos y caprichos de la naturaleza¡¡¡ Y bueno todo es Prueba y error.

    Saludos a Todos, Saludos Carlos, y esperamos mas de tus resultados, que por cierto muy buenos estan¡¡¡
     
  3. aincioa

    aincioa

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    A mí también me gustaría preguntar a Carlos.

    Cuando quitas el agua con lejía, o el agua esterilizada del enjuague de la jeringa, ¿Cómo haces para que las semillas no se salgan de la jeringa? Supongo que esperarás a que decanten, porque de otra manera al no tener filtro en la punta de la jeringa, se iría el agua llevándose las semillas...

    Por otro lado responderte que tras varios intentos de esterilizar las semillas con lejía y sacando muestras para verlas en el microscopio a cada tanto, no puedo decir el tiempo óptimo de esterilización para que se rompa la testa sin quemar el embrión. Es muy difícil ver la degradación de la testa, al menos para mí.

    Saludos.
     
  4. CARLOS_H

    CARLOS_H

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Agradesco de antemano vuestra comprension :27chocaloscinco:

    El tiempo . . .
    Escasos 10 minutos, pero la clave esta mas en el reposo de las semillas que sea al menos unas 24-30 hras en agua con poquisimo azucar para activar las bacteria y esporas de hongos que pudieran estar presentes. No son solo los hongos los enemigos del cultivo IN VITRO esa capa blanca que aveces aparece como baba son bacilos y pueden ser hasta peor que los hongos rapidamente acidifican y hechan a perder todo :pataleando:
     
  5. CARLOS_H

    CARLOS_H

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Espero a que se decanten ( vayan hasta el fondo las semillas ) asi saco el agua hacia arriba.
    La supuesta ruptura o degradacion de la testa, por mejorar la germinacion creo mas se deba a otros factores los comento en el sig mensaje
     
  6. CARLOS_H

    CARLOS_H

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Mi escasa practica o experiencia con Orquideas es . . .
    Muyyyy breve y escasa :icon_rolleyes:
    Mi trabajo es en areas verdes de empresas y es mantenimiento total e incluye las plantas de ornato de las oficinas; Dracenas, anturios, julietas, romeos y . . . Orquideas que son el lujo para una sala de recepcion de una empresa.[​IMG] [​IMG]

    por eso comence a tener Phalenopsis
    Apenas este marzo2012 polinice 11 flores, cruce moradas con blancas, rayadas con pintas y una mezcolansa re buena :5-okey: , solo phal. Y todas desarrollaron capsulas y capsulas bien llenas[​IMG][​IMG]
    Ya antes habia separado Kekis, y tambien sembrar una trozo de vara floral en un frasco esteril con musgo y enraizador sin nada de azucar y desarrollo el keiki.
    Pero al comenzar con cultivo Invitro ha sido una serie de tropezones :( uno detraz de otro, el que quede demasiado solido o liquido el medio es nefasto. Ya capte que debe ser mas semi-solido
    Luego llego tal vez un golpe de suerte :52aleluya: GERMINACION MASIVA con una simple formula de agar, tomate, banana, azucar, complejo B, un 1/2 gramo de fertilizante foliar.
    Despues quise repetir las mismas condiciones formula, ingredientes, cantidades, semillas etc. y el resultado tuvo variaciones enormesss pero variaciones malas; frascos con nulo desarrollo, frascos con 1 a tres semillas que germinaban, frascos que se ve semillas que se hidratan y medio crecen 1 mm pero no fotosintetizan y de ahi no van a desarrollar.
    Comienzan las interrogantes . . . cual fue la falla? cuales han sido las variables que cambiaron?
    Y ya casi concluyo pero solo he usado Phal, tal vez con otra especie haya diferencias.
    1- Usamos ingredientes ejem Tomate que asumimos que tienen un supuesto contenido mineral . . .
    Un terreno optimo te puede dar 20-30 ton por Hra una tierra agotada no llega ni a 1 sola y los frutos son de escasos y raquiticos contenidos.
    Si a la formula le falta un mineral que va en partes por millon, se detiene el crecimiento y asi pasen meses no hay desarrollo.
    2- la formula agar +abono 20-20-20 la unica foto que vi en el foro es de un repicado, por eso ni me atrevo a usarla
    Esta semana voy a hacer una prueba, mis orquideas estan sanas por que el fertilizante se los agrego en PPM (partes por millon) cada 10 dias
    Cuando hacemos los cultivos Invitro usando fertlilizantes tal vez nos estamos pasando y eso provoca una presion osmotica inversa en algunos casos, por eso es que una simple sopa de tomate y platano aveces da resultado. Voy a tratar de buscar la mejor calidad de algunos ingredientes o tal vez hasta me ponga Yo a cultivar mis propios tomates Calidad premium:11risotada:
    Estos dias ando bien feliz, es que el año pasado compre dos orquideas y le pregunte al vendedor que lo conosco desde hace 7 años que son? no supo contestar me dijo parecen Lirios :smile: . Una la dividi en 2 partes pues estaba bien grande, estaban sembradas hasta con tierra, no sabian ni que eran
    Yo las monte en troncos secos y estan vivas y sanas y hasta parecen ser Stanhopeas, pero si no son . . . me conformo sean Gongoras:52aleluya:
    es que me costaron escasos $ 100 pesos por las dos y luego hice 3 :11risotada: o sea $ 33 pesos cada una.
     
  7. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Una forma de evitar resultados tan diversos con los medios de cultivo es estandarizando el medio, el medio MS sería una solución. En un medio hecho a base de tomate, plátano, piña, agua de coco, fertilizante y agar de poca pureza, tenemos un coctel de variables que no podemos controlar, el resultado, ya lo resumio Carlos.

    Con respecto a la testa, cubierta externa de algunas semillas que no permite la entrada de agua al embrión, solo algunas orquídeas la presentan, la mayoría de las orquídeas epífitas no la tienen.

    Un clon, son una serie de organismos geneticamente idénticos, un ejemplo, son los keikis obtenidos de la inflorescencia de phalaenopsis, son idénticos a la planta madre y aquí tienen una muestra: De está orquídea corte la inflorescencia, cada corte llevaba una yema(meristemo), lo desinfecte y lo coloque en el medio MS con reguladores del crecimiento, la yema dio lugar a varios brotes, cada uno se convirtió en una planta nueva, entonces todas las plantas obtenidas de la yema, son un clon.

    [​IMG][/URL]

    las plantas in vitro
    [​IMG][/URL]

    Las plantas con raíces las saque del frasco y ahora están creciendo en macetas de 7 cm de lado.
    [​IMG][/URL]
     
  8. CARLOS_H

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Y mas sencillo aun es agarrar las tarjetas bancarias e ir a comprar las orquideas que me gusten :11risotada:
    Pero a algunos nos fascina el cultivo y exprimentar nuevos metodos, por eso esta especie de plantas nos ha fascinado por ser aveces tan impredescibles son un verdadero reto.
    Para las varas florales Yo solo use algo de musgo y tierra vegetal que recolete en el monte, puse a remojar medio dia los trocitos de vara con alguna yema en agua con muy poquito enraizador comercial para toda planta son minerales con AIA(hormona enraiza), el frasco con el musgo seco lo puse a hervir media hora luego ya frio agrege las varas y el agua donde se remojaron sin nada de azucar asi no hubo hongos ni bacterias. a los dos meses asi estaban
    [​IMG]
    Un simple frasco de nescafe, musgo y tierra vegetal y poquisimo Raizal que el Kilo me cuesta a 100 pesos y Yo uso kilos en mi trabajo diario.
    Respecto a las formulas caseras la clave es bien simple . . .
    TOMATE 150 grs de jugo, 100 grs banana, 20 grs azucar 10-12 grs agar
    en esta formula que Yo vi un dia resultados asombrosos la limitante era bien simple . . . [​IMG]
    Usen tomates bien lindos y sabrosos, calidad premium
    Ya una vez me criticaron por probar con la lengua el agua del lavado despues del cloro :11risotada: , pero esa es la clave deben ser los Tomates asi bien rojos y rellenos apetecibles y sabrozos.
    Ya no fue un golpe de suerte, ya vi los resultados :52aleluya:

    No importa pasarse una semana buscandolos, o pagar el triple por ellos
    Pues esa fruta para darse requirio un suelo sin deficiencias o un super cultivo y asi mismo va su contenido mineral.
     
  9. CARLOS_H

    CARLOS_H

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    AGAR, TOMATES, BANANA, COMPLEJO B, AZUCAR
    Y TODO MOLERLO CON EN LA LICUADORA CON UNA CUCHILLA NUEVA O BIEN AFILADA Y METERLO SIN COLAR A LOS FRASCOS, AUN EN LAS SEMILLAS DEL TOMATE DEBE IR ALGUN COMPONENTE NECESARIO
     
  10. Alancitop

    Alancitop

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Amigo, no lo se yo, pero no se sí quisiste decir 150gr de jugo de tomate, o 150ml de jugo de tomate o 150gr de tomate y de alli lo que salga de jugo????? y cuanto de Benerva o B1????

    Gracias Carlos, como siempre, contigo se aprende algo nuevo¡¡¡
     
  11. CARLOS_H

    CARLOS_H

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra


    Ok
    La ultima fue la buena: 150gr de tomate y de alli lo que salga de jugo
    de complejo B marca Dr simi :11risotada: unas 3 pastillas
     
  12. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Concuerdo contigo Carlos en que, de la calidad del jitomate dependan los resultados, además, el medio es más económico que el MS y más fácil de preparar. Los inconvenientes son: es un medio artesanal, varia de lote a lote de jitomate, los metabolitos acumulados en las frutas varían de acuerdo a la época de colecta y algunos pueden inhibir el crecimiento de las plantas y como dices, puede ser que tenga un efecto osmótico.

    Por ello, prefiero el medio MS que se utiliza en todo el mundo para cultivo in vitro, me asegura resultados y buen crecimiento, inconvenientes, difícil de conseguir en México y caro.
     
  13. CARLOS_H

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Medio de Murashige y Skoog o (MSO o MS0 (MS-cero)) es
    Macronutrientes
    • Nitrato de amonio (NH 4 NO 3) 1650 mg / l
    • El cloruro de calcio (CaCl 2 • 2H 2 O) 440 mg / l
    • Sulfato de magnesio (MgSO 4 • 7H 2 O) 370 mg / l
    • Fosfato de potasio (KH 2 PO 4) 170 mg / l
    • El nitrato de potasio (KNO 3) 1900 mg / l
    Los micronutrientes
    • Ácido bórico (H 3 BO 3) 6,2 mg / l
    • Cloruro de cobalto (CoCl 2 • 6H 2 O) 0,025 mg / l
    • Sulfato de cobre (CuSO 4 • 5H 2 O) 0,025 mg / l
    • Sulfato ferroso (FeSO 4 7H 2 O) 27,8 mg / l
    • Sulfato de manganeso (MnSO 4 • 4H 2 O) 22,3 mg / l
    • El yoduro de potasio (KI) 0,83 mg / l
    • Molibdato de sodio (Na 2 MoO 4 • 2H 2 O) 0,25 mg / l
    • Zinc sulfato (ZnSO 4 • 7H 2 O) 8,6 mg / l
    • Na 2 EDTA • 2H 2 O 37,2 mg / l
    aditivos orgánicos comunes
    • i-Inositol 100 mg / l
    • Niacina 0,5 mg / l
    • Piridoxina • HCl 0,5 mg / l
    • Tiamina • HCl 0,1 mg / l
    • IAA 1-30 mg / l
    • Kinetin 0.04-10 mg / l
    • Glicina (recristalizado) 2,0 mg / l
    • Edamine S 1,0 g / l
    • Sacarosa 20 g / l
    • Agar 10 g / l
    Si notan excepto el agar y el azucar, las demas cantidades son fracciones de gramo, su precio escasamente llegaria a 3 dls o unos $ 40 pesos mexicanos. Si estan pagando mas de esa cantidad . . .
    Los estan estafando como a Indios vendiendoles espejitos
    oro+por+espejitos++1.jpg
    Si alguno tiene interes en la formula aqui en Monterrey N.L. municipio de Escobedo hay una fabrica de fertilizantes que tal vez les pueda fabricar esa formula sobre pedido, se llama AGRONUTRIENTES DEL NORTE es de unos Musulamnes Iranies Yo trabaje en esa fabrica alla por el 2003, pero no puedo Yo ni ir ni comunicarme por que sali de ahi mas disparado que un Corcho de Champange, me estaba tirando a la hermana del Dueño GIF008.gif
    Y andaba mas enfurecido que el Profeta Mahomma
    [​IMG]
     
  14. Alancitop

    Alancitop

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Jajajajaja te pasas Carlos!!!

    Bueno una pregunta a TODOS¡¡¡

    Que puedo hacer si mo frasco con unos protocoormos ya creciditos esta contaminado, apenas lo note hoy y estaba totalmente blanco, los lavo con lejia al 20%???? O definitivamente ya los doy x perdidos!!
     
  15. CARLOS_H

    CARLOS_H

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Yo saque algunos que estaban en un frasco contaminado, median escasos 3 mm la mayoria y algunos 2 mm, aun lavandolos en una solucion 4 partes de agua mas una de cloralex, al ponerlos en frascos nuevos iban contaminados opte por lavarlos bien con agua comun y ponerlos sobre corteza en unos contenedores de plastico transparente, es un medio no esteril
    La mitad han sobrevivido y continuan desarrollando
    los riego con agua de lluvia y muyyyy poquito fertilizante cada 3 dias.