Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Tema en 'Cultivo in vitro de orquídeas' comenzado por Monstera, 3/4/08.

  1. Jonathan VT

    Jonathan VT

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola, espero que todos se encuentren bien. Paso de rápido.
    No quiero molestar, pero la esterilización es a 15 lb/in cuadrada, que es aprox. 1.02 atm.
    A mi me parece que es muy buena opción el uso de la olla express.

    Otra cosa es que, no creo que el agar se desnaturalice a esos 93 oC (o no se usarian las autoclaves), puede que el problema sea la calidad del agar, pues es un polimero.

    Dulce, yo recomendaria que si vas a esterilizar en horno o el esterilizador de biberones, esterilizaras 2 o 3 veces, una vez al dia, y hasta se pueden dejar los frascos en el recipiente. Esto con el fin de que, si sobrevivieron esporas de hongos o bacterias, estas germinen de un día al otro, y en teoria la segunda vez y tercera vez estas son destruidas. Ayuda que este calientito para que esto pase. Si quieren más detalles, yo sugeriria buscar sobre tindalización.

    Por la misma idea, me parece buena opción que, al sembrar semillas de capsula abierta, se dejen repsasr un dia en agua con un poco de azúcar (no mucha claro), como ya nos ha sugerido antes Carlos H.

    Tal vez son muchas suposiciones de mi parte, y aunque aun no he sembrado, ya espero tener pronto semillas.

    Gracias a todos por compartir sus aportes, dudas y comentarios en este tema, realmente creo que se aprende de todo, y a difundir más esta práctica. Yo he aprendido mucho de ustedes.

    Nos vemos (o leemos) pronto, porque ya es muy noche.

    Att. Jonathan
     
  2. Ramamayor

    Ramamayor Rama, Ramita.

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Os dejo una foto de una sencilla cámara: una simple bolsa de las de guardar mantas (menos de 2 €); se consigue un espacio cerrado y estéril. Es una alternativa a la caja de plástico.




    [​IMG]
     
  3. Caramelito

    Caramelito

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Ramamayor tienes razón se ve muy practico,

    Jonathan muchas gracias por los consejos pero me queda una duda... No es dañino para el agar volver a calentar después de que cuaja? Ese es el problema que le veo a esterilizar varias veces. y si tienes razón, en el esterilizador que sube a 93 grados C no se desnaturalizó pero se contaminó, los que se desnaturalizaron fueron los del horno que si subió a más de 150 grados C

    zarq esta vez conseguí las ollas a presión y seguí tu consejo de dejarlos ahí hasta el día siguiente, van 2 días y se ven bien, si sigue así el fin de semana siembro

    Por cierto pedí unos frascos a río verde y me dijeron que ya tenía que sacar las plantulas pero uno de ellos se ve muy lleno pero también con protocormos, se valdrá que saque las plantulas grandes y redeposite los protocormos en otro frasco? Después les pongo una foto.
     
  4. zarq_ii

    zarq_ii Wild possum!!

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Que bueno caramelito que ya no has encontrado contaminación!!, es cierto que hay que preguntar la disponibilidad de frascos a rio verde??:16duda: y además preguntar te de paso en cuanto te salio!! me quiero animar por unas cattleyas!!!


    SALUDOS!!!
     
  5. Caramelito

    Caramelito

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola Zarq si, en la página de río verde das tu email y ellos rápido te contactan, tienen algunas BLC, Paphios, Phal, y Oncidium, casi todos son hibridos, un frasco de cattleya te cuesta $300
    En mi experiencia te diré que no quedé satisfecha al 100% porque pedí unos frascos y unas plantas, que enviaron en 2 paquetes distintos y ellos los envian por estafeta OCURRE, es decir que para evitar malos manejos de los paquetes tu tienes que ir a la sucursarl de estafeta a recogerlos, y bueno a mi me mandaron cada paquete a una sucursal diferente y una de ellas al otro extremo de la ciudad.

    Además me enviaron mal los frascos, en cantidad de frascos si me enviaron justo lo que pedí pero, no me enviaron las plantas que yo pedí, me refiero faltaron unos hibridos y de otros me los pusieron repetidos.

    Pero las plantas se ven sanas.

    Bueno por ultimo corraborando lo que dijo Jonathan las autoclaves no suben a tal presión como mencionabas Zarq las autoclaves de laboratorio esterilizan a 15psi que equivale a 1.02 atm una olla de presión tampoco sube tanto debe estar igualmente ligeramente arriba de 1 atm

    Saludos.
     
  6. zarq_ii

    zarq_ii Wild possum!!

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Mil gracias caramelito uno de estos dias que llegue mi cheque me animo a pedir unos frascos y les cuento :5-okey: , en cuanto a los autoclaves no quiero entrar en una discución, sobretodo por que luego hay malos entendidos pero chequen este LINK ahí vienen uno autoclaves desde 0.21 BAR hasta 2 BARs con regulador de temperatura y presión que son variables dependientes una de la otra pero estables, 1 BAR = 1ATM = 14.5 PSI, Más la olla de presión no tiene regulador de presión, si medidor, pero no regulador, por lo que llega alcanzar hasta 10 atm antes de explotar así que aguas Checar la primera ley de la Termodinámica y también Ley de Gay-Lussac!!!!:sirena:


    SALUDOS!!!
     
  7. Feuret

    Feuret

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola a todos, estoy de regreso, con la,mala noticia de que la cápsula de mi phal mini no se dió, por otro lado encontré tiradas en el campo 3 cápsulas de aprox 15 cm supongo que alguien quiso arrancar la orquídea del árbol y le tiró las cápsulas pues al voltear hacia arriba la vi en el árbol al parecer son de catasetum, la verdad no tengo los medios ni el tiempo para hace germinar las semillas, si alguien las quiere con gusto se las cambio por una paphio, tengo muchas ganas de una, luego les pongo foto de las cápsulas. Saludos
     
  8. Feuret

    Feuret

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Éstas son las cápsulas de catasetum 15 cm de largo. Están muy grandes:

    [​IMG]
     
  9. zarq_ii

    zarq_ii Wild possum!!

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola Feuret, Animate a intentar plantarlas pero a pesar de que son muy grandes, me parece haber leido en otra liga que las encontraste en la naturaleza, antes de sembrarlas o tratar de sembrarlas en invitro debes tener la certeza de cuanto tiempo lleva de maduración y si no lo sabes, deja que almenos la vainas ya cortadas se pongan algo amarillas, pues me ha pasado que las he cortado muy verdes y nadamas no germinan, has la prueba de flotación primero con agua simple yaque si la haces con azúcar el agua es más densa y flotan tambien las maduras y las que no lo estan , por eso hechalas a flotar y las que se hundan son las buenas!!:5-okey:


    SALUDOS!!
     
  10. Feuret

    Feuret

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra


    Gracias Zarq, pues las dejaré que se pongan amarillas pues están muy verdes aún si tienes algún medio de cultivo efectivo porfis pásame la receta, mientras tanto insisto si alguien las quiere adelante!!! Saludos
     
  11. zarq_ii

    zarq_ii Wild possum!!

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Listo feuret!! ya te he enviado algunos articulos con info de cultivo invitro tres en español y tres en ingles, te recomiendo el de propagación de laelia especiosa, pues contiene comparación de aditivos de crecimiento espero te sea útil!!!:5-okey:


    SALUDOS!!
     
  12. luak

    luak

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    al sur...
    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Respecto a la esterilizacion de botes, yo utilizo el horno y nunca he tenido problemas de contaminación ni desnaturalizacion, lo unico que hay que controlar, es que no suba demasiado la temperatura.
    Gasrac me alegro de leerte....saludos.(No me he olvidado de lo que tenemos pendiente)Hasta pronto, suerte con la bletilla, yo tambien participare en el proyecto, jeje ya hablaremos.
     
  13. Feuret

    Feuret

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Muchas gracias Zarq, los,voy a checar, espero tener éxito!! Saludos
     
  14. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Bueno quiero comentar algo sobre la esterilización de material en la autoclave o en olla de presión. Primero todas las esporas de hongos y levaduras, que son la forma de vida más resistentes, se destruyen a 121ºC por 15 minutos, luego sí queremos esterilizar un medio de cultivo se requiere alcanzar esa temperatura y mantenerla por 15 minutos.

    Yo utilizó tanto la olla de presión de casa, como la autoclave para esterilizar medios de cultivo y no tengo ningún problema con la consistencia del medio, solo me aseguro de utilizar agar bacteriológico puro y adicionar de el de 7-8 g/L y listo.

    Con respecto a ¿qué presión el vapor de agua alcanza una temperatura de 121 ºC? Se utiliza la ecuación de Clausius-Clapeyron y el resultado es 2 atmósferas o 29.4 PSI.
     
  15. Caramelito

    Caramelito

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Bueno yo sigo con la discución (aclarando que discución no es un pleito si no un intercambio de argumentos con fines constructivos)

    zarq La ley de Gay-Lussac es valía bajo cierta condiciones:
    Primera trabajando con gases ideales, en el caso del vapor de agua no es un gas ideal pero si muy cercano a este, asi que esta condicion se considera valida
    Segunda, el sistema se mantiene a volumen constante, considerando el sistema nuestra olla a presión, (siempre y cuando no explote) tiene un volumen constante y esta condición se cumple
    Tercera. No existe intercambio masico entre el sistema y el exterior..... OJO!!!!! esto se cumple solo los primeros minutos antes de que se abra la valvula de seguridad, después la ley de Gay Lussac no es valida, se necesia usar la ley de los gases ideales PV=nRT ya que escapa vapor de agua. por esto no sube indefinidamente la presión ni la temperatura aunque siguen siendo variables dependientes.

    Ahora bien, considerando la primera ley de termodinámica, que nos dice que la enegía subministrada al sistema MENOS LA ENERGIA QUE LIBERA EL SISTEMA nos da la energía acumulada dentro del sistema. Al calentar la olla de presion, subministramos energía, que se aculmula en el sistema HASTA que se tiene la energía suficiente para realizar el trabajo de abrir la Valvula, en ese momento se libera energía por una parte al realizar el trabajo de abirir la valvula ademas del trabajo de expulsar vapor de agua a presion, Por esto la energía del sistema no aumenta indefinidamente.

    La presión máxima que alcansa la olla a presión depende de la valvula de seguridad, y se pueden hacer valvulas que soporten grandes presiones, sinembargo yo creo que las de cocina esta diseñadas para que no suba mucho la presion.

    Tienes razon que hay autoclaves que suben a 2 atm, pero el agar bacteriológico, según las hojas de seguridad indica que se debe esterilizar a 15 psi y 121°C

    Una disculpa si me estoy desviando mucho del tema.....

    Luak Si tienes razon el problema que yo tuve con el horno es que subi mucho mas de 121°C y por eso se desnaturalizó, lo malo es que la temperatua minima de mi horno es de 150°C pero con las ollas creo que ya quedo ese problema resuelto.

    Por otra parte el consejo de dejar los frascos cuajar dentro de las ollas y abrir hasta el dia siguiente sigue funcionando de maravilla, los frascos siguen sin contaminación

    Saludos