Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Tema en 'Cultivo in vitro de orquídeas' comenzado por Monstera, 3/4/08.

  1. arcangell

    arcangell C. de Begonias y adeniums

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    COMPOSICIÓN QUÍMICA DEL PLÁTANO contenido en 100 g
    Calorías – 100
    Proteínas – 1’3 g
    Hidratos de carbono – 22’8 g
    Grasas – 0
    Agua – 73’8
    Fibra – 4’9 g
    Calcio – 9 mg
    Hierro – 0’6 mg
    Yodo – 2 mcg
    Magnesio – 38 mg
    Cinc – 0’23 mg
    Sodio – 1 mg
    Potasio – 350 mg
    Vitamina A – 33 mcg
    Viatamina B1 – 0’06 mg
    Vitamina B2 – 0’07 mg
    Vitamina B3 – 0’8 mg
    Vitamina B6 – 0’51 mcg
    Vitamina B9 – 22 mcg
    Vitamina C – 10 mg
    Triptófano
    Betacaroteno
    Cobre
    manganeso
    Fósforo
    Selenio

    COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA PIÑA MADURA 100 gramos
    [​IMG]

    COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA PIÑA 100g de piña Fresca
    Agua (g) 86
    Proteína (g) 1
    Lípidos (g) 0.1
    Carbohidratos (g) 8
    Fibra dietaria (g) 2
    Sodio (mg) 2
    Potasio (mg) 180
    Calcio (mg) 27
    Magnesio (mg) 11
    Hierro (mg) 0.3
    Zinc (mg) 0.2
    b-caroteno (mg)25
    Tiamina (mg)40
    Riboflavina (mg)30
    Ácido nicotínico (mg) 0.1
    Vitamina C (mg) 21


    COMPOSICIÓN QUÍMICA DEL TOMATE
    Agua................................. 94 %
    Hidratos de carbono........... 4 %
    Grasas............................... 0 %
    Proteínas............................ 1 %
    Cenizas.............................. 0.3 %
    Otros (ácidos, vitaminas, etc.)....... 0.7 %
    El contenido vitamínico normal de los tomates para mercado es:
    Vitamina A (alfa y beta caroteno)..... 1700 UI
    Vitamina B1 (tiamina).................. 0,10 Mg/100 g
    Vitamina B2 (riboflavina).............. 0,02 Mg/100 g
    Vitamina B5 (niacina).................. 0.60 Mg./100 g
    Vitamina C (ácido ascórbico).......... 21,00 Mg/100 g
    El pH del jugo oscila entre 4 y 4,5.

    COMPOSICIÓN QUÍMICA DEL COCO POR 1OO GR COMESTIBLE
    Calorías – 395
    Proteínas – 6 g
    Lípidos – 40 g
    Hidratos de Carbono – 16 g
    Fibra – 12 g
    Ácidos grasos saturados – 35 g
    Ácidos grasos monoinsaturados – 2 g
    Ácidos grasos poliinsaturados – 1
    Calcio – 25 mg
    Hierro – 3’6 mg
    Magnesio – 32 mg
    Cinc – 1’8
    Sodio – 20 mg
    Potasio – 360 mg
    Fósforo – 113 mg
    Selenio – 810 mcg
    Vitamina B1 (Tiamina) 0’1 mg
    Vitamina B2 (Riboflavina) 0’02 mg
    Vitamina B3 (Niacina) 0’30 mg
    Vitamina B5 (Ácido pantoténico) 0’3 mg
    Vitamina B6 0’054 mg
    Vitamina B9 (Ácido fólico) 26 mcg
    Vitamina C – 2 mg
     
  2. arcangell

    arcangell C. de Begonias y adeniums

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Alguien sabe por que después del autoclave el ph baja? e ajustado los ph a 5.8 pero después del auticlavado e medido los medios y están en 7... que se puede hacer?
     
  3. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola de nuevo,

    Después de un pequeño receso les traigo información de interés para las personas que todavia batallan mucho para conseguir agar-agar y se trata un sustituto fácil de conseguir que puede funcionar y la receta la pueden encontrar aquí,

    Página original en Inglés:
    http://www.ehow.com/how_12050002_make-own-agar-orchids.html

    Página traducida con google translate:
    http://translate.google.com.mx/tran...w_12050002_make-own-agar-orchids.html&act=url

    La receta utiliza como gelificante cubos para preparar caldo de res y grenetina ó en su defecto gelatina sin sabor.

    Para las personas que abusan en las cantidades de agar en sus cultivos in vitro, a continuación pueden ver los efectos, desde utilizar muy poco (izquierda), hasta demasiado (derecha),
    Foto obtenida de: http://mygarden.rhs.org.uk/blogs/si...11/orchids-in-test-tubes-1-how-much-agar.aspx

    [​IMG]

    Para los que utilizan formulaciones desde caseras, hasta la preparación de Knudson C, a continuación pueden ver el efecto de utilizar pocos compuestos (izquierda) o una concentración muy alta de los mismos (derecha),
    Foto obtenida de:
    http://mygarden.rhs.org.uk/blogs/si...rchids-in-test-tubes-2-how-much-nutrient.aspx

    [​IMG]

    Por ello es importante no abusar de las cantidades recomendadas en especial las vitaminas (La conflictiva Benerva y las excesivas cantidades que algunos emplean) y el puré de tomate por ejemplo, al momento de preparar los medios de cultivo.


    Arcangel, no creo que puedas hacer nada por remediar el PH. Después de pasar por el autoclave, muchos compuestos como la sucrosa, algunas sustancias orgánicas como el tomate y otros compuestos se degradan a otras sustancias y por tal motivo también cambia el PH. Yo por eso no utilizo tomate porque el medio se vuelve muy ácido con el tiempo. Por cierto para los que hacen preparación de tomate, se recomienda máximo 100gr de tomate maduro por 1 litro de medio y no 3 tomates como dicta la receta, aunque esta última cantidad pueda funcionar.

    Saludos.:5-okey:
     
  4. roberto.serpa74

    roberto.serpa74

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    HOLA GERARDO, GRACIAS NUEVAMENTE POR TUS APORTES, Y ESTE ESTA SUPER BUENO, CON ESTO SI ESTOY SEGURO QUE EL PROBLEMA QUE TE HABIA COMENTADO ESTA YA SOLUCIONADO EN PARTE
     
  5. Papiro97

    Papiro97

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Madre mía q chulas :happy:
     
  6. arcangell

    arcangell C. de Begonias y adeniums

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    tengo una duda.
    estas semillas son de phalaenopsis?
    [​IMG]
    la encuentro muy grande para ser semilla de orquidea.
     
  7. eliseoteson

    eliseoteson

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    No no son de ninguna orquídea.


    Gerardín, muy interesante el tema del agar. Siempre utilicé agar en exceso y la diffusión de nutrientes hacia la raíz de la planta se dificulta en las primeras etapas de desarrollo. y los residuos de las plantas no se difunden bien. Una vez que las plantas tienen buen sistema radicular a mi me gusta más usar un medio más sólido, la raiz ya es capaz de buscar el nutriente y los frascos aguantan un poco mejor el transporte.
    Sobre le medio basado en caldo de res... no saldrán orquídeas con cuernos? jajaj.
     
  8. eliseoteson

    eliseoteson

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Les comparto un par de fotos de semillas de Phragmipedium.
    La escala son 100 micrometros (1/10 de milímetro).

    Luz reflejada
    [​IMG]
    Luz transmitida
    [​IMG]
     
  9. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Eliseo,

    A mi el agar y los sustitutos me dieron muchos dolores de cabeza en un principio por no tener con que pesarlos. Afortunadamente ahora eso es historia.
    Hace algunos años, sucedió que transportortando 10 frascos de un lugar a otro en auto, al llegar al destino, el agar con el movimiento se convirtió en puré y tuve que replantar de nuevo.
    Otra ocasión el agar era tan duro que tuve que partirlo con cuchillo para sacarlo del frasco :smile:.

    La Carragenina tiene sus inconvenientes también ya que no gelifica adecuadamente si no existen determinados iones en el medio y además es igual de inhibidora de germinación para algunas orquídeas como lo es el agar. Parece que el proceso para obtener estos gelificantes de algas verdes y rojas son los que generan estos inhibidores. Además estos geles no son totalmente inertes como se creía.

    El Gelrite de Merck Co., también es un gelificante pero para industria alimentaria y por lo que he leido, es el peor de todos.

    Phytagel de Sigma también tiene sus fuertes puntos débiles a pesar de ser un producto a base de peptona. No es tan bueno como se dice a pesar de que el fabricante habla de todas las bondades que finalmente son puramente mercadotécnia.

    Los principales puntos malos de todos estos geles son, la eficacia para sembrar ya sean tejidos o semillas, ya que no son totalmente inertes, además del exagerado costo de compra.

    Los reportes que he leido indican que el gelificante ocupa el 85% del costo de los medios de siembra y a nivel vivero eso es oro $$$$$, por eso siempre se buscan sustitutos que abaraten la producción.

    A nivel casero como muchos de nosotros esto puede ser no tan significativo, pero hay reportes que indican que hay sobre explotación de algas verdes y rojas y se espera que el agar y la carragenina comiencen a subir de precio en los próximos años por la escases de la materia prima.

    Ahora bien, con las harinas que he utilizado, leo que se metabolizan y no entregan los nutrientes como deben :-?, aunque a pesar de ello veo buen desarrollo en el material con el que estoy trabajando, aunque estos gelificantes no me servirán en lo absoluto para el cultivo de tejidos ni mucho menos para cultivo in vitro de violetas africanas. :(
    Existe una combinación que supuestamente es excelente e incluye 2 harinas y agar a determinadas concentraciones, pero no pienso hacer más pruebas en éste rubro.

    En estos momentos tengo otro gel susituto que después de documentarme más a fondo, no como en el caso de las harinas, veo que es el material ideal por su bajo costo y su naturaleza más inerte, pero tengo que probarlo todavia antes de emitir un juicio final.

    En cuanto a los 'Aditivos', leí que el Chitosan ó Quitosano en español (quitina de camarón procesada. En palabras fáciles, la cascara del camarón procesada industrialmente) añadido al medio mejora notablemente el desarrollo de plántulas de orquídeas, por eso hice la pregunta anteriormente de quien lo había usado en el foro para compartir sus experiencias, pero veo que nadie lo ha hecho. Vean la información de los usos en Wikipedia: http://es.wikipedia.org/wiki/Quitosano

    A futuro pienso cambiar de medios sólidos a medios líquidos en pro de un desarrollo uniforme y óptimo crecimiento en un menor tiempo posible. Hay muchos retos que vencer especialmente la "vitrificación" de las plántulas y la contaminación que se pueda desencadenar que es más díficil de controlar, pero estoy leyendo como evitar este inconveniente y por lo mismo ya me duelen los ojos de tanto leer; en tan sólo 4 noches ya me leí dos libros completos que me prestaron para sacar mis conclusiones y tener un punto de referencia de donde partir. Hay puntos muy importantes en estos libros que yo desconocia y ahora tengo que leer otros 2 libros que descargué de la Web, pero ahora sí lo haré con calma, ya que estos no tengo que entregarlos como los que me prestaron.

    En cuanto al caldo de res, sería bueno comentarlo si es que alguien lo utiliza y si ven cuernos creciendo o escuchan rumiar a las orquídeas, nos platican :11risotada:.

    Saludos. :5-okey::5-okey::5-okey:


    Foto obtenida de la Web: Orquídeas en medio de cultivo líquido.

    [​IMG]
     
  10. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola, algunos datos importantes:

    La fitohormona citocina en las concentraciones adecuadas es promotor de la diferenciación y proliferación celular en las plantas. A altas concentraciones ocurre lo contrario.

    Para los que acostumbrar a usar plátano para la germinación, éste contiene altas concentraciones de Citocinas. Ahora ya conocen el motivo por el cual es un producto inhibidor de germinación en orquídeas.
    Supongo también que la cantidad de ésta fitohormona tiene una relación directamente proporcional en cuanto a la maduréz del plátano y la alimentación por fertilizantes a la planta, antes de cosechar la fruta. Es decir la citocinina no siempre tiene las mismas concentraciones en la fruta.

    Cuando el licuado de plátano se combina con carbón activado para el replante de orquídeas, el carbón absorbe parte de las citocininas y reduce la concentración de esta fitohormona en el medio, por eso puede funcionar para crecimiento, no para germinación.
    Desde que yo inicié mis pruebas de siembra y hasta la fecha, jamás he utilizado platano para mis cultivos in vitro, por que ya conocía estos efectos inhibidores.

    Muchas fitohormonas de uso agricola provienen de 'extractos de plantas' (algas de no se que tipo) y seguramente esos procesos de extración son similares en un determinado momento al utilizado para extraer el agar de las algas (posibles fitohormonas en el agar por el proceso de extracción), esa es mi teoría. Por eso supongo la naturaleza inhibidora del agar y la carragenina. Aunque recuerden, no todas las empresas extraen el agar con el mismo proceso.
    Algunos laboratorios, 'lavan' el agar antes de utilizarlo, enjuagandolo varias veces con agua destilada, es decir remueven las sustancias inhibidoras antes de preparar sus medios de cultivo.

    En cuanto a todas las teorías del ácido abcísico para el cultivo in vitro debido al contenido en el tomate y otros frutos, son teorías totalmente infundadas (en parte), ya que el comentado ácido se encuentra principalmente en semillas de frutas para evitar que germinen (frutas verdes) y plantas que entran en dormancia por la acción del frío en invierno (hibernación).
    Cuando la fruta esta totalmente madura adios al ácido y como muchos utilizan la receta del tomate maduro, no tienen porque preocuparse.

    Saludos:5-okey::5-okey::5-okey:
     
  11. arcangell

    arcangell C. de Begonias y adeniums

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Saludos a todos.. despues de mucho tramite y busqueda me e armado una camara de fluijo laminar para intentar con begonias a partir de trozos de hoja.

    con orquideas no puedo intentar a un ya que las que compre se extraviaron y los demas proveedores de ebay no mandan a mi pais.

    Alhuno de vosotros sabra donde puedo conseguir semillas?
    o alguien generoso que le sobre me vendiera algunas?

    [​IMG] [​IMG] [​IMG]


    saludos desde chile.
     
  12. Loborios

    Loborios

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola, chileno. Tengo semillas de c. aurantiaca, de hace un par de años, así que no sé si aún son viables. Como hace unos días planté algunas, si germinan te aviso para mandarte. Un cordial saludo desde España.
     
  13. eliseoteson

    eliseoteson

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola Gerardín,
    Gracias por tomarte el tiempo de postear toda esa información.

    Discrepo un poco contigo en el tema del agar...

    El agar es el medio mas utilizado en todo el mundo para cultivo in vitro de orquídeas... El abuso de la concentración da problemas, pero nada que no se pueda superar con un poco de experimentación para conseguir la dosis justa.

    Hemos probado otros gelificantes para soventar problemas específicos pero personalmente no he encontrado ni una sola ventaja con respecto al agar.

    Sobre los costos... para mi no es un costo significativo. El agar dentro de nuestro laboratiorio el agar se lleva un presupuesto despreciable. Un Kilogramo de agar de buena calidad (A111) cuesta 138 dólares y con el tienes para hacer 220 litros de medio... es decir unos 4000 frascos...
     
  14. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Eliseo,

    La información que escribí, la obtuve de dos publicaciones muy serias, una es de la 'Australian Journal of Crop Science' de éste año y la otra la estoy buscando (no la encuentro) que es de una publicación científica de la India.

    A continuación un extracto de la publicación Australiana que habla un poco sobre la búsqueda de sustitutos al agar:

    [​IMG]

    Quizá tu producción de plantas no sea tan grande y por eso no es tan significativo el costo. Pero si hablamos de una producción de más de 25 mil plantas mensuales que fué de donde saqué el dato, (una publicación de una Universidad Hawaiana que ayuda en las investigaciones técnicas a los viveristas comerciales), definitivamente el costo del agar se dispara. Imaginene todos cuantos frascos para replante y cuantos kilos de agar al año se consumen.

    Pero bueno, lo importante aquí es la información, y por eso me gustaria hacerte algunas preguntas:

    ¿En tus cultivos utilizas distintas concentraciones de agar para algunos géneros o es la misma concentración para todas tus siembras?

    Comentanos algún caso específico con el que te has topado.

    ¿Cuantos replantes realizas durante la vida de la planta in-vitro?

    Aquí están los datos del agar que utilizas y veo que no proviene de las algas del género Gelidium donde comúnmente se extrae el agar, sino del género Gracilaria (interesante):

    http://www.phytotechlab.com/TechInfo/A111-info.pdf

    Saludos. :5-okey:
     
  15. eliseoteson

    eliseoteson

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola Gerardín

    A eso voy... nadie de aquí va a cultivar 25000 plantas mensuales. Nosotros tenemos un laboratorio modesto con capacidad para unas 20000-30000 plantas anuales y de verdad que el costo en gelificantes no es para nada traumático. Si en cambio lo es el costo de electricidad.

    Ahora estamos trabajando a 4.5 gr/l de A111 en los repiques y sobre 4 gr/l en el medio de siembra. Cada planta pasa por dos o tres frascos, dependiendo del género. Algunos géneros requieren hasta 5 repiques pero eso no es lo común.
    Sobre casos específicos, concentraciones demasiado altas de agar hacen que la planta no pueda asimilar los nutrientes en el medio en su entorno por la baja difusividad y eso se traduce en crecimiento lento y excesivo desarrollo de raíz versus hoja... otras veces el medio se agrieta cuando es penetrado por las raices y el contacto no es óptimo. otro síntoma es el crecimiento de la raíz hacia arriba.

    Yo he probado diversos tipos de agar y nunca he observado reacciones fitotóxicas, aunque si inhibición de la germinación a partir de cierta concentración, pero creo que no es el agar en sí sino la baja difusividad de nutrientes la que lo genera.

    Saludos!

    Eliseo