Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Tema en 'Cultivo in vitro de orquídeas' comenzado por Monstera, 3/4/08.

  1. Alancitop

    Alancitop

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Este es mi Cultivo mas exitoso hasta el momento¡¡¡

    [​IMG]

    Este es un hibrido de encyclia adenocaula x encyclia candolei
     
  2. arcangell

    arcangell C. de Begonias y adeniums

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    colviendo a leer sobre los costos del invitro, el otro dia leia un ensayo sobre cultivo invitro de semillas de orquidea solo con fertilizante en polvo de esos con macro y micronutrientes , tiamina y maizena.
    en el estudio aparesian incluso los repiques en maizena y eran tan efectivos como los de agar y medios MS.
    alguno de ustedes a probado con maizena? quizas esa es la formula secreta.. jeejejeje
    el estudio fue hecho en mexico por un universidad. Las proximas semillas que lleguen, si es que llegan hare el experimento.

    Alguien sabe cuanto demoran en germinar las semillas?? tengo un frasco hace dos semanas y las semillas las veo sin cambios, quizas me quedo con mucha agua.
     
  3. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Yo he hecho las pruebas con Maizena lo comenté anteriormente con Eliseoteson, aunque no lo hice claramente en éste hilo, solo comenté sobre 'harinas que se metabolizan'.
    Lo pueden verificar en alguno de mis posts anteriores en éste hilo.

    Lo que encontraste Arcangell sobre las pruebas sobre una Universidad Mexicana, no es la única institución que lo ha hecho porque he encontrado muchos reportes sobre diversos centros de investigación que la han utilizado. Muchos hablan maravillas de la Maizena, pero no comentan claramente los inconvenientes y la cantidad de replantes que han realizado para que este supuesto gelificante funcione. Yo encontré dos reportes de centros de investigación serios que dicen la verdadera realidad de este supuesto gelificante 'tan prometedor'. :(

    Recordemos que cuando un centro de investigación o Universidad publica algo, lo hacen tan rápido y de tal manera que los demás institutos queden opacados por no publicar nada, esto con tal de ganar una mención honorífica en el ámbito científico y por eso se omiten algunas veces detalles interesantes.

    La publicación científica más seria que encontré dice que el almidón de maíz (Maizena en éste caso) se metaboliza al momento de la cocción (técnicamente se convierte en pan al momento de la preparación del medio y sobre todo en la esterilización), por ello no libera los nutrientes de forma adecuada, además que el medio se reblandece con el tiempo (porque prácticamente se convirtió en pan) y que por ser de color blanco, no puedes ver claramente cuando ocurre contaminación. Además hay que hacer replantes al menos bimensuales para no tener problemas.

    Mi experiencia:


    Cuando leí una tésis de titulación sobre el uso de la Maizena me emocioné pensando en el precio tan barato del gelificante, además que supuestamente las plantas aumentaban su materia seca y decidí seguír religiosamente todos los procedimientos para la preparación del medio, pero ¡Oh! desilución.

    A los 4 días el medio preparado con Maizena comenzó a liberar agua y al cabo de 1 mes comenzó a reblandecerse tanto que mejor replanté todo nuevamente en carragenina.
    Si utilizas ligeramente menos Maizena (10 gramos menos) para liberar los nutrientes de forma más efectiva, el medio gelifica muy bien, pero al cabo de 5 a 6 semanas comienza a hacerse atole, se hace totalmente líquido y las plantas comienzan a hundirse y hay que volver a replantar (demasiado trabajo y más riesgos de contaminación).
    Si usas poco más almidón de lo normal (10 gramos más), el medio endurece demasiado y las plantas ya no se desarrollan de la misma forma que con el agar y el crecimiento es más lento y también se libera agua, aunque no tanta como en los medios anteriores.

    Si combinas Agar, Maizena y Sémola de Trigo (no recuerdo las concentraciones de cada uno), algunos documentos de centros de investigación dicen que el medio es excelente, pero para mi son demasiadas pruebas y errores que yo al menos prefiero evitarme.

    He probado carragenina con un poco de Maizena (Mezcla de 70% gelificante y 30 % Maizena) y la mezcla me parece mejor, aunque si de almidones y vitaminas se trata, prefiero utilizar agar o carragenina y un trozo de papa licuado que contiene almidones y vitaminas naturales No procesados industrialmente en lugar de la Maizena, que a la larga, ésta última puede contribuir de forma negativa a siembras y replantes.
    La papa y sus almidones mejorarán la cantidad de materia seca en las plantas cultivadas, pero sin los riesgo e inconvenientes de la Maizena.

    En la siguiente foto, noten la cantidad de agua en el primer frasco con Maizena en la cantidad adecuada (izquierda a derecha). Se trata de un replante. El color de la clorofila en la planta disminuyó y es de un color verde muy pálido.
    El segundo frasco, la maizena 10 gramos menos de lo indicado.
    Noten como la plantita se hundío y comienza a tener síntomas graves de secado en sus hojas por el exceso de agua.
    El tercer frasco la cantidad normal de Maizena según la tesis que leí, vean como se despega el supuesto gelificante del frasco por la gran cantidad de agua liberada.
    El último frasco es la regeneración de mis cultivos que salieron del baño de colchicina, sembrados en carragenina con medio de Murashige & Skoog, sin Maizena. La regeneración de las plantitas fué evidente y casi de inmediato.


    [​IMG]

    Si alguien quiere utilizar la Maizena, adelante, no les quito la intención.
    Lo que publico aquí son los resultados e inconvenientes que yo obtuve.



    En cuanto a los fertilizantes, si funcionan, pero en las concentraciones adecuadas. Yo desde hace tiempo usaba mi fórmula mejorada de fertilizantes (con agar ó carragenina) comparando con la fórmulación del medio preparado con Hiponex.

    ¿Porqué fertilizantes en las concentraciones adecuadas?

    En la fabricación de fertilizantes la principal fuente de nitrógeno es la Urea y esta produce muchas reacciones químicas y algunos compuestos indeseables para las plantas invitro que al corto plazo son tóxicos (tratandose de concentraciones relativamente altas, 1g por ejemplo).

    En el medio de tomate, las semillas germinan, pero no se desarrollan bien, quedan enanas. Tampoco germinan todas las semillas en la mayoría de los casos.

    Si se siembran las semillas de orquídea en fertilizante con pulpa de tomate ó agua de coco ó licuado de plátano, germinan y crecen más que con el tomate sólo. pero igualmente no germinan todas las semillas y también tardan en hacerlo. las plantas se desarrollan un poco más que con el medio de tomate solamente.

    Si siembran en medio de Knudson C ó el de Murashige & Skoog, verán un altísimo porcentaje de germinación de semillas (para una gran cantidad de generos y especies en la mayoría de los casos), el desarrollo es superior con ambos medios en todos los aspectos.

    Ahora imaginen si combinan estos resultados de los medios casero con la Maizena como gelificante.:sorprendido: :-? :( :desconsolado:.

    Desde que yo comencé a utilizar el medio de Murashige & Skoog (modificado para mis requerimientos) con carragenina como gelificante, hace poco más de 1 mes, me dí cuenta de las super ventajas. Las semillas comienzan a germinar de inmediato, que en máximo dos días se nota como reverdecen vistas a través de la lupa (20X, ya publiqué en éste hilo las fotos anteriormente).
    En el medio con fertilizante tardán mucho más en germinar, desde 1 a 3 o incluso hasta 5 meses y no germinan todas y en contados casos, ninguna germina, además el crecimiento de los protocormos/plántulas no es tan uniforme por el tiempo que tardaron en germinar algunas semillas.

    Espero toda esta información sirva para todos los que estan experimentando.


    Carlosc, yo he utilizado 3 partes de agua oxigenada tal como viene de la botella en una mezcla de 30% agua oxigenada y 70% agua normal para hacer un 100% y funciona generalmente bien, aunque eso no es indicio que dejarás de tener posible contaminación.

    Saludos. :5-okey::5-okey::5-okey::5-okey::5-okey:
     
  4. luak

    luak

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Buenas a todos tengo semillas recien cogidas de epidendrum nocturnum para intercambiar si os interesan ya sabies...saludos.
     
  5. libni6

    libni6

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    orale increible¡¡¡, saludos
     
  6. Morgancultor

    Morgancultor

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola a todos! Al fin termine de leer este amplísimo post, empecé el lunes y hoy recién termino, bueno todavía no he hecho los cultivos pero aquí van mis preguntas:
    Hace una semana le compre a un señor una Domingoa Purpurea y fue cuando me intereso todo esto, polinice 3 flores, para luego darme ¡que ya tenía como 10 flores fecundadas! Ahora no se que hacer pues son muchas cápsulas por mantener para la pobrecilla. También en una de las orquis de mi abuelita hay una cápsula, pero no se cuanto tiempo tiene, optare por envolverla con papel filtro pues por acá hace bastante calor, ¿es correcto lo que haré? Ah, y también hay una cápsula de prosthechea cochleata:smile: un saludo a todos!
     
  7. aincioa

    aincioa

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Estos días estoy de rodriguez y he aprovechado para sembrar tres docenas de frascos.
    Agradecer, lo primero, a aquell@s que me han enviado las semillas, por su regalo.

    En segundo lugar, comentar mis experiencias:
    He tratado las semillas en una solución saturada de glucosa durante 48 horas a temperatura ambiente (25ºC estos días) manteniendo cada muestra en una jeringuilla y agitándolas a cada rato.

    Esterilización:
    El agua oxigenada genera muchas burbujas entre las semillas que son difíciles de
    eliminar. Tras varios días desde la siembra los frascos quedan cubiertos de una nata que forma una costra (¿bacterias?).

    Esterilizando con lejía durante unos seis minutos, aclarando cuatro veces y sembrando "al vapor" no se forma esa capa, pero la parte superior del medio también aparece velada.

    Osea, un desastre total.

    Ya iré comentando.

    Saludos.
     
  8. Monstera

    Monstera

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola Aincioa,

    48 horas en solucion de glucosa es demasiado, máximo, máximo 24h. La mayoría de las veces con 12 y ir haciendo el vacio (tapa el agujero de la jeringuilla "sin aguja, jajaja" con el deco y tira y suelta el embolo, combina con apretar y verás que en poco todas las semillas pierden las burbujas y se hunden.

    Siempre que me he pasado con las horas de la solución sale la dichosa "agua blanca".

    Si usas agua oxigenada, hazlo de día y pon los frascos a la luz enseguida, para que la que quede en el frasco se degrade y no te haga la capa.

    6 minutos podría ser poco con lejía, haz alguna prueba con 8. Y que caiga la mínima cantidad de agua con las semillas.

    Con todo eso deberías solucionar el problema.

    Un gran saludo a todos,
     
  9. luak

    luak

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola Monstera, me elegra leerte de nuevo por aquí, aprovecho para dejarte unas fotos de las semillas de bletilla, germinan de maravilla y crecen muy rápido, da gusto....Las sembré en febrero y mira como estan

    [​IMG]

    [​IMG]

    Saludos.
     
  10. netpiolin

    netpiolin ♥♥♥

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Esas plantas son una envidia. Todo un experto, Sí señor
     
  11. luak

    luak

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Gracias Netpiolin, pero en verdad el mérito es de las semillas, de todas las que he sembrado son las más gratificantes. Fijate, en cinco meses y sin repicado como se ponen, da gusto. Netpiolin a ver si pongo unas fotos de las semillas de encyclia, tambien han germinado de maravilla, lo malo es que me volvi a pasar con las semillas y hay muchísimas, jeje, nunca aprendo....:mrgreen:

    Un saludo.
     
  12. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra


    Luak, felicidades por el logro, sólo que tendrás que replantar en breve ya que en la foto comienza a notarse la liberación de fenoles en la base de la planta (color café más obscuro) y esos fenoles son fatales para las plantas.

    Aclaro a todos que repicado y replante no es lo mismo, aunque a veces los empleamos como sinónimos erróneamente.
    Cuando se replanta se cambia de medio y no necesariamente se repica. El repicado es la separación de de las plantulas que han crecido muy juntas. Varias plantas separadas (repicadas) pueden sembrarse en un mismo frasco con medio nuevo (replante).

    A continuación les muestro una foto de la misma cruza pero en medio de siembra diferente. Se trata de una Lc River Compton.

    El replante de ambos frascos se realizó el mismo día, hace unas 8 semanas. Inicialmente estaban sembradas en un medio con demasiado agar en medio de knudson C.
    Los protocormos eran alargados y blancos (ver la foto izquierda que es más evidente, no se trata de raíces) y no ovoides como los vemos en libros y otras publicaciones, esto debido al exceso de agar (18g) al momento de la siembra.
    En el replante, la concentración de agar empleado es de 8g. con 0.5g de carbón activado y 100mg de un antioxidante más efectivo (a mi punto de vista) que el carbón activado (mi formulación). El frasco de la izquierda contiene protocormos que tenían inicialmente mejor desarrollo en el frasco de siembra y el nuevo desarrollo de hojas surgío a partir de un medio preparado con fertilizantes.
    En el frasco de la derecha los protocormos que estaban menos desarrollados en el frasco de siembra inicial, los replanté en medio de Murashige & Skoog.
    Notese el máximo desarrollo en el medio de Murashige, mientras que en el medio con fertilizantes, sólo algunos protocormos han respondido de forma regular al fertilizante.

    [​IMG]


    Este desarrollo 'regular' en el medio con fertilizantes, se debe a que la gran mayoría de las orquídeas no poseen en sus genes 'transportadores de urea', en términos más entendibles es que las plantas no pueden asimilar de forma efectiva la urea, lo que no sucede con el Nitrato de Amonio encontrado en la formulación de Murashige & Skoog.
    Además la urea produce muchas reacciones químicas en el medio in vitro, convirtiendose en diferentes formas de Nitrógeno que en algunos casos resulta tóxico para las plantas in vitro, especialmente para las terrestres, seguido por la mayoría de las epífitas.

    ¿Porqué utilicé la formulación de Murashige & Skoog y no la de Knudson C?
    Esto se debe a que empleo la misma formulación con pequeños cambios para siembra/replante y cultivo de tejidos.
    Esto me evita tener muchos químicos y formulaciones muy diferentes, así estandarizo mis procedimientos y me es menos díficil conseguir los químicos y también es más barato.

    El antioxidante que empleo para evitar los fenoles, ha resultado muy efectivo, ya que los protocormos y plántulas que he cortado en dos para hacer pruebas no presentan ninguna liberación de fenoles, todo lo absorbe mi antioxidante, incluso sin el uso de carbón activado.
    El carbón activado se empleaba principalmente para la absorción de fenoles, pero hoy día se emplea principalmente para estimular el desarrollo de raíces en las plántulas y para la germinación de terrestres y algunos Cypripediums y géneros afines (Phragmipedium y otros).


    Saludos.
     
  13. luak

    luak

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Gracias Gerardin, como bien dices esas plantulas piden un replante(gracias por la aclaración) a gritos,he estado sembrando terrestres ibéricas y se me acumula el trabajo.....
    Como siempre gracias por toda la informacción que nos brindas, para mi es muy valiosa...:5-okey:
    Por cierto..¿cual es ese antioxidante que usas?
    Saludos.
     
  14. gasrac

    gasrac aficionado

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Buenas tardes
    Luak ..estas seguro que todo el merito es de las semillas...yo no lo logre i creo que eran las mismas.....;) bromas aparte felicidades por el estupendo aspecto que tienen:5-okey:
    gerardin37,gracias por la informacion que vas subiendo es muy interesante.
    Monstera un saludo.
     
  15. luak

    luak

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Gracias Gasrac, oye ¿como van los epis?