Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Tema en 'Cultivo in vitro de orquídeas' comenzado por Monstera, 3/4/08.

  1. novato9

    novato9 Aprendiendo.

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola a todos, soy nuevo y he estado leyendo sus comentarios en el foro y realmente me ha interesado mucho el "cultivo in vitro de orquídeas", en este momento yo estoy realizando una pasantia en un laboratorio de biotecnología y me gustaría realizar esta actividad pero no cuento con semillas de orquídeas, no se si alguien me las pueda proporcionar o vender, por favor... un saludo... :happy:
     
  2. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Entre los múltiples oxidantes para absorber fenoles que pueden utilizar está el siguiente:

    http://www.phytotechlab.com/Detail.aspx?ID=27

    A continuación una foto con medio preparado con Maizena, el cual tuve que sacar todos los protocormos para replantarlos en medio nuevo.
    Se nota que algunos protocormos sufrieron vitrificación en este medio que a las 4 semanas comenzó a convertirse en atole, liberando demasiada agua.

    [​IMG]

    En mis comentarios anteriores expresé que la Maizena se metaboliza (no libera nutrientes de forma adecuada). Si se añade poca, es malo porque se hace líquida casi de forma instantánea. Si se utiliza la indicada, tarda un poco más en licuarse, pero termina por convertirse en atole y de todas formas se metaboliza. Si se utiliza mucha peor, porque si de hecho no libera nutrientes de forma adecuada, a mayor concentración libera mucho menos nutrientes.
    Se puede apreciar en la foto debido a la vitrificación de algunos protocormos el resultado de la Maizena para mi fué catastrófico, ya que varias 'plantas' murieron en éste medio.




    A continuación una foto con el último compuestos que utilicé para el replante:

    [​IMG]

    La foto esta muy amarilla por tomarla con luz cálida fluorecente por la noche. Pueden apreciar que no utilizo la Maizena al 100% sino que la mezclo con mi gelificante en proporción de 70% gelificante, 30% Maizena.

    En la siguiente foto sólo utilicé 3 plántulas de Brassocattleya y algunos cuantos protocormos para realizar la prueba y obtener datos para ver que tan estable es la mezcla gelificante-Maizena. Hasta la fecha el medio no se ha licuado y sigue firme.

    [​IMG]

    La parte positiva que le veo a este medio es la forma en que se dispersa el carbón activado en el gel.
    En algunos medios preparados con sólo agar o sólo carragenina, el carbón activado se va al fondo, dejando una ligera capa transparente de gelificante que no contiene carbón y aquí el carbón se dispersó de forma uniforme en todo el medio.
    También pueden observar que utilizo muy poco carbón activado, ya que sólo lo utilizo para estimular la producción de raíces y no para absorber fenoles.

    Para las personas que piensan erróneamente que algunos miembros del foro son pioneros en el tema del cultivo in vitro, les informo que desde alrededor de los años 60's o antes ya se sembraban semillas de orquídeas en jugo de tomate, manzana, piña, papa y otros.
    Tales jugos se mezclaron con el medio de Knudson C y otros medios complejos porque los jugos sólos no eran eficientes, daban poca germinación o resultaban plántulas con desarrollo deficiente (enanas).

    En el cultivo de Vandas a partir de semillas, existe una vieja receta de esas antiguas investigaciones que afirma que estas semillas germinan con sólo una mezcla de peptona y azúcar, el detalle interesante que hay que recalcar hoy día es que las semillas si germinan, pero la pregunta del millón es ¿Que tanto se desarrollan? y de estas ¿Cuántas semillas germinan?

    Desde mi perspectiva y a forma de resumen:

    - Si van a sembrar orquídeas terrestres de forma casera utilicen en su medio de siembra puré de tubérculos y frutas, entre 3 o 4 distintas, aquí no se recomienda urea ni fertilizantes.

    - En la siembra de orquídeas epífitas añadan una pequeña dósis de fertilizante al medio de cultivo casero, para lograr mayor desarrollo.

    - Si tienen los recursos para comprar (que no es muy caro, el problema puede ser conseguirlo), prefieran el medio de Knudson C modificado o el medio de Murashige & Skoog (que resulta mejor que Knudson C en muchos casos), con estos preparados los resultados son superiores a cualquier medio casero.

    Saludos.
     
  3. EstebanJ

    EstebanJ

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola a todos,

    Quería comentarles que me han sobrado semillas de Phalaenopsis de una cápsula que abrió hace poco. Yo he utilizado algunas pero me han sobrado otras cientos. Quien las quiera son gratis. Vivo en Buenos Aires.

    Saludos a todos!

    EstebanJ
     
  4. arcangell

    arcangell C. de Begonias y adeniums

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    saludos amigos.. tengo una enorme duda... que pasa si me queda mucha agia dentro de los frascos... las semillas de ahogaran?
     
  5. eliseoteson

    eliseoteson

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola Arcangell,
    Depende de los géneros, en Phragmipedium y Paphiopedilum la presencia de agua "libre" ayuda a germinar, en otros géneros depende... a las Phalaenopsis por ejemplo no les va muy bien si hay demasiada agua.
    Un truco para si te queda mucha agua: Pon algo bajo el frasco que lo incline unos grados, así tendrás semillas en "seco" y otras en el agua.
    Saludos.
     
  6. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola, un detalle:

    Algunos cultivadores locales aquí acostumbran añadir algunos mililitros de agua al momento de siembra, esto para dispersar las semillas sobre el agar (medio) ya solificado.
    Conforme las semillas vayan germinando, el agua se absorberá por los protocromos.

    Lo que no debe suceder es una gran existencia de agua en todo momento, es decir el medio solidificado no debe liberar agua extra una vez avanzada la germinación. Si esto llegase a suceder, las posibilidades de vitrificación son muy altas y los protocormos pueden comenzar a morir.

    Yo en lo particular nunca añado agua extra una vez solidificado el medio y a la fecha, las únicas semillas con problemas no germinan porque son estériles (sin embrión).

    Saludos:5-okey::5-okey::5-okey::5-okey::5-okey:.
     
  7. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola estimados amigos, disculpen alguno de ustedes a hecho cultivo in vitro con phragmipediums? Tengo semillas y las quiero sembrar....
     
  8. eliseoteson

    eliseoteson

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola Luis,
    Trabajo con Phragmipedium en Colombia. andreettae, besseae, schlimmi, pearcei, kovachii... etc y sus híbridos.
    Tienen sus trucos, no son tan fáciles de trabajar como las Cattleyas, Phalaenopsis.. etc.
    Que especies quieres sembrar?
    Saludos!
     
  9. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Quiero sembrar phrag. Waliisii :(
     
  10. eliseoteson

    eliseoteson

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Tengo unos cuantos frascos de wallisii sembrados evolucionando mas o menos bien.
    Puedes usar MS entre 1/2 y 1/4 con 100ml de agua de coco por litro y poco agar. Usa el minimo agar posible que mantenga el medio sòlido. (si el agar es de buena calidad unos 4 gr/l).

    Los frascos han de estar siempre por debajo de 25 grados.
    Saludos!
     
  11. arcangell

    arcangell C. de Begonias y adeniums

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    gracias, intentare inclinarlo y vere que pasa. se nota tienes experiencia en ello.
    muy agradesido.
     
  12. Caramelito

    Caramelito

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola a todos?

    He tenido problemas para esterilizar medios de cultivo que contienen agua de coco, cuando no le pongo no tengo ningún problema, pero los que contienen agua de coco, aunque esterilice mas tiempo, en dos días están contaminados, alguna idea de por que, o como evitar que se contaminen?

    Gracias
     
  13. arcangell

    arcangell C. de Begonias y adeniums

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Yo tengo problemas para esterilizar el agua.. hasta el momento voy en 45 minutos en olla a presión dentro de frascos de laboratorio. quizas el problemas no es cuanto tiempo le das al esterilizado, si no a la cantidad que estas esterilizando y como lo haces. No describes ocmo lo haces, pero si el medio lo esterilizas dentro de los frascos definitivos a los 15 - 20 minutos en olla a presión no se contaminan. Esto es por que los frascos contienen poco medio de cultivo. Pero asi como el agua que yo esterilizo en un medio mas grande, el tiempo necesario para la esterilizacion debe ser mayor.
    En un princioio con muestras de tejido, trozos de begonia.. segun yo mi problema de infeccion era la esterilizacion de las hojas y probe muchas formas, algunas de las cuales literalmente cocian las hojas por lo fuerte y me salian hongos siempre. hasta que deduciendo y aislando que parte de los procedimientos de siembra estaba fallando, llegue a la conclusion de que un periodo de 20 minutos para esterilizar determinado volumen de agua era deficiente. aunmente el perido de esterilizacion a 45 minutos y el indice de contaminacion bajo notablemte. E de suponer que las contaminaciones anteriores de las pruebas con semillas de orquidea en que se contaminaban, era precisamente por mal esterilzacion del agua con el que enjuagas las semillas o las muestras vegetales. en mis ultimas pruebas de semillas de orquidea y que aun no germinan, no e tenido insidencias de contaminacion en los medios, esto quiere decir que antes de esterlizar el agua por mas tiempo de 10 frascos se contaminaban 4, ahora de 20 frascos aun no aparece contaminacion en ninguno y eso qeu estoy utilizando envases plasticos de toma de muestra medica. Asi que asumo que el problema que tienes quizas no es con el agua de coco, si como esta esterilzada, o el agua con la cual enjuagas las semillas. revisa nuevamente el metodo y quizas por ahi va el problema. angtes pensaba que por el hecho de usar agua destilada, esto significaba que estaba limpia, pero leyendo y leyendo llegue a la conclusion que estan libres de sales y metales, pero nadie te asegura esten libres de bacterias u hongos.

    Ahora tengo una duda enorme.
    dentro de los metodos de esterilizacion de semillas e visto dos mas usados.
    10 a 15 minutos en legia la 5%
    5 a 10 minutos en legia al 10%
    5 a 10 minutos en legia al 5%

    cual de estos es el mas indicado? tengo miedo que me haya pasado de tiempo y a tres semanas de no germinacion haya sido por que me pase con la legia y se quemaron las semilla so estas simplemente no eran viables. e estado usando 5 a 10 minutos en legia al 10%.

    gracias a todos por sus consejos y espero respuesta ansioso.
     
  14. Loborios

    Loborios

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Yo utilizo lejía al 5 (4 de agua más una de lejía, más deterjente) durante diez minutos y no tengo problemas. Un saludo
     
  15. eliseoteson

    eliseoteson

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Compañero, yo uso este:

    *10 min en lejía al 10% + 5 min en lejía al 5% (almbas soluciones con un poquito de jabon para bajar la tensión superficial de la misma). Finalmente un lavado en agua destilada (se aconsejan 3 lavados pero uno es mas que suficiente).

    Saludos!