In vitro: 1 - Preparacion del medio de cultivo

Buenas a todo el mundo!!

Aunque este sea mi primer mensaje en este foro, no quiere decir que no haga tiempo que este por aqui...no suelo postear mucho...pero lo que subo, intento que sea decente...

Ayer por la tarde se me ocurrio que podria preparar medio de cultivo, y lo hice!, aunque fue mi primera vez, ahora estoy esperando respuestas negativas sobre contaminaciones, si no es asi...pronto subire la parte 2, sembrado de semillas en el medio.

Voy a explicar el procedimiento que hize yo...parece complicado pero es muy simple, la otra cosa es que no se te contamine...

Antes de empezar decir que utilize la fórmula del plátano:

-100g. de plátano licuado (pasado por la turmix)
-10g. de Agar Agar, (son unas algas marinas, que se utilizan para la comida (normalmente los chinos), disponibles en cualquier tienda normal de dietetica o productos naturales) "Natur house".
-15g. de Azúcar
-4 comprimidos (de 300mg) de vitamina B1 (supradyn, benerva...) disponibles en farmacia.
-y por último 900ml de agua destilada. (disponible en supermercados a 1€ los 5 litos...muy barata!!)

En cuanto a material necesario para la preparacion:


-Horno
-Olla
-Cuchara de madera o plástico
-Embudo de vidrio
-Potes de cristal atornillables, tubos de ensayo...
-toallas de papel
-Papel de aluminio
-Balanza


Unas fotos de el agar-agar para que veais como es, y la vitamina B1 (compuesto de tiamina):





Antes de empezar tenemos que limpar bien todos los frascos donde vamos a verter el medio. (se puede limpiar con ethanol, lejia, alcochol...) y lo colocaremos sobre las servilletas de papel.



Pasos a seguir:

1-Mezclar los productos del medio de cultivo (previamente citados), quedara una cosa asi:



Despues has que pasarlos por la turmix, para que no se queden grumos, y seguidamente por un colador fino para evitar impurezas.

2-Ponemos el agua destilada a calentar (900ml) en la olla.



3-Seguidamente encendemos el horno a 150 ºC

4-Antes de que empieze a hervir el agua, apagamos el fuego i vertemos los componentes (ya pasados por el colador)



5-Mezclar bien el agua con el medio, (usar cuchara de madera o plástico.)

6-Una vez mezclado bien, pondremos el medio en una jarra (previamente limpia) y distribuiremos el medio de cultivo en los frascos mediante el embudo de vidrio, pondremos aproximadamente 1cm de medio por pote.



7-Tapamos los potes dejando la tapa un poco floja, para que no nos exploten los frascos dentro del horno. En los tubos de ensayo utilizaremos tapones de algodon, que impiden que pasen las bacterias.

8-Cubriremos los frascos con 2 capas de papel de aluminio.

9-Colocaremos los potes en el horno, previamente encendido, mucho cuidado en quemaros, ya que lo hemos tenido un buen rato encendido a una temperatura bastante elevada (usar guantes termicos).



10-Despues de unos 30 minutos, apagaremos el horno y dejaremos enfriar toda la noche dentro de el. A la mañana siguiente, con mucho cuidado apretaremos las tapas flojas y le pondremos una banda elastica de sujecion (colerteros, gomas de plástico, etc...)



Como podeis ver, ya esta frio, y el liquido a pasado a ser gelatina:



Una vez los tengamos todos, solo falta guardarlos en un sitio bien luminoso (sin sol directo) y a una temperatura de 20 ºC mas o menos.

Y a esperar si hay inicios de contaminaciones, si en 2 o 3 semanas no ha aparecido nada, podemos proceder a plantar nuestras plantitas...aunque no quiere decir que ya este libre de contaminaciones...



NOTA:

Con este "tutorial" no intento que hagais lo mismo que yo, ya que esta e smi primera vez, y no se si sera fiable, aunque por ahora no hay indicios de contaminaciones ni nada por el estilo, simplemente lo cuelgo para aquella gente que quiera saber un poco mas en esta vida...

Muchas gracias a todos y espero que os haya gustado...ahora a probar vosotros!!!!!

Saludos,

Carlos.

 

Re: In vitro: 1-Preparacion del medio de cultivo.

Muy bien!!!!

Esta muy bien el seguimiento, a ver como te sale. Esperamos la 2ª parte, y la 3ª y la 4ª...
Algun dia quiero ser yo la que haga su 1r medio!

Saludos y mucha suerte!
Auge85

 

Re: In vitro: 1-Preparacion del medio de cultivo.

muchas gracias! ahora solto falta esperar, os ire informando de como evoluciona la cosa...^^

 

Re: In vitro: 1-Preparacion del medio de cultivo.

Hola Ghom, buena suerte en tu cultivo vas a sembrar semilla o vas a propagar tallos y yemas?
saludos

 

Re: In vitro: 1-Preparacion del medio de cultivo.

FELICIDADES, Y ESPERO QUE TODO SALGA BIEN, TAMBIEN ESTARÉ PENDIENTE DE LO QUE HAGAS, ASI QUE N OLVIDES SEGUIR MOSTRANDO LA SIGUIENTE PARTE, CUENTANOS TODO
SALUDOS

 

Re: In vitro: 1-Preparacion del medio de cultivo.

hola a todos, gracias por vuestro apoyo, voy a propagar semillas de una capsula de phalaenopsis que ya esta apunto de abrirse, se esta poniendo amarilla, intentare cojerla antes de que se abra, ya que tiene pinta de estar madura, y trabajar con semillas estériles es más facil...aunque no se puede decir nada...por que las bacterias y los focos de contaminacion, estan por tos laos... pero bueno.. a ver que pasa...

Seguire informando de como evoluciona el asunto...

 

Re: In vitro: 1-Preparacion del medio de cultivo.

Ghom, lo iremos siguiendo. Yo he tenido muy mala experiencia con la formula del platano.
Espero que tu tengas mejor suerte.


Lucinda

 

Re: In vitro: 1-Preparacion del medio de cultivo.


Ghom

Aunque ya tenemos a nuestra amiga Monstera, que es la reina del cultivo in vitro casero, me ha encantado tu reportaje, bien por las fotos y bien por lo bien explicado que está. Esperemos que todo salga adelante y te digo lo mismo que auge85, esperamos los siguientes reportajes, de meter las semillas al medio, de verlas crecer, de repicar a otros tarros... etc...

Muchísimas gracias por el post

Un saludo

 

Re: In vitro: 1-Preparacion del medio de cultivo.

Hola Carlos,

Las semillas de Phal germinan muy bien, así que seguro que no tendrás problemas y las verás engordar en seguida. El único problema que tiene es el ajuste del Ph.

Qué te paso exactamente Lucinda? así podemos saberlo y no hacer nosotros el mismo error.

Un saludo a todos,

Olivia

 

Re: In vitro: 1-Preparacion del medio de cultivo.

Hola a todos!

Olivia tienes razon, se me olvido el paso del pH, ya que con la formula del platano hay que ajustarlo...

-Añadiremos NaOH (Hidróxido de sodio) para aumentarlo
-Añadiremos HCL (Àcido clorhídrico) para disminuirlo...hasta conseguir el apropiado (5 - 5,5 - 6).

Lo que no sabia que con la formula del tomate, se ajusta el solo perfectamente...la proxima vez lo haré con esa fórmula, ya que parece más fácil..Gracias a todos de nuevo! seguire informando...^^

 

Re: In vitro: 1-Preparacion del medio de cultivo.

Hola,
entonces falta algún paso intermedio del 1º?
y de donde sacais las cápsulas de las semillas?

toy mas verde.

gracias.

 

Re: In vitro: 1-Preparacion del medio de cultivo.

si usan la formula del tomate se estabiliza solo el ph.

para tener capsulas y semillas tenes que polinizar tus orquideas antes.

Fórmula del Tomate
250.00 g de tomate bien maduro y sanos. Hacer una pasta y colar en colador bien fino.
10.00 g de agar-agar
15.00 g de azúcar
4 comprimidos de Tiamina (vitamina B1) de 300 mg
900 ml de agua destilada

Fórmula de Tomate con Banana
40 g de banana hecha puré o licuada
100.00 ml de jugo de tomate
10.00 g de agar-agar
20.00 g de azúcar
4 comprimidos de Tiamina (vitamina B1) de 300 mg
900 ml de agua destilada

Fórmula de Tomate con Zanahoria
100.00 ml de jugo de zanahoria
100.00 ml de jugo de tomate
10.00 g de agar-agar
15.00 g de azúcar
4 comprimidos de Tiamina (vitamina B1) de 300 mg
800 ml de agua destilada

los saque de www.microplanta.com pero no tengo el link a ese articulo.
saludos y exitos con el in vitro, si me enimo y lo hago les cuento (tengo una capsula de Paphiopedilun insigne)

EDITO: estas formulas no sirven para las terrestres!!!
saludos!!!

 

Re: In vitro: 1-Preparacion del medio de cultivo.

Navegando por internet, he encontrado esto, que creo que es interesante... Está escrito por un tal Jorge Alejandro Paulete Scaglia. Espero que no le moleste que lo ponga aquí. Son distintas fórmulas para hacer el medio de cultivo para hacer germinar las semillas de orquídeas.

Fórmula de Knudson "C"

1.000 g de Nitrato de Calcio
0.250 g de Fosfato monopotásico
0.250 g de Sulfato de Magnesio
0.500 g de Sulfato de Amonio
0.025 g de Sulfato de Hierro
0.0075 g de Sulfato de Manganeso
20.00 g de azúcar
10.00 g de agar-agar
1 litro de agua destilada (agua sin cloro)
El pH debe estar alrededor de 4.8 - 5.0.

Fórmula del plátano

100.00 g de plátano maduro hecho puré o licuado
10.00 g de agar-agar
15.00 g de azúcar
4 comprimidos de Tiamina (vitamina B1) de 300 mg
900 ml de agua destilada

Fórmula del Tomate

250.00 g de tomate bien maduro y sanos. Hacer una pasta y colar en colador bien fino.
10.00 g de agar-agar
15.00 g de azúcar
4 comprimidos de Tiamina (vitamina B1) de 300 mg
900 ml de agua destilada

Fórmula de la piña

200 ml de jugo de piña dulce y maduro
10.00 g de agar-agar
15.00 g de azúcar
4 comprimidos de Tiamina (vitamina B1) de 300 mg
800 ml de agua destilada

Fórmula del Tomate con Zanahoria

100.00 ml de zumo de zanahoria
100.00 ml de zumo de tomate
10.00 g de agar-agar
15.00 g de azúcar
4 comprimidos de Tiamina (vitamina B1) de 300 mg
800 ml de agua destilada

Fórmula del Tomate con Banana

40 g de banana hecha puré o licuada
100.00 ml de zumo de tomate
10.00 g de agar-agar
20.00 g de azúcar
4 comprimidos de Tiamina (vitamina B1) de 300 mg
900 ml de agua destilada

Fórmula del Profesor Burgeff

1.000 g de Nitrato de Calcio
0.250 g de Sulfato de Amonio
0.250 g de Sulfato de Magnesio
0.020 g de Sulfato de Hierro
0.250 g de Fosfato bipotásico
0.250 g de Fosfato monopotásico
20.00 g de azúcar o miel de abejas
12.00 g de agar-agar
1 litro de agua destilada (agua sin cloro)

Fórmula de La Garde

1.00 g de Sulfato de magnesio
1.00 g de Nitrato de Calcio
1.00 g de Fosfato monopotásico
1.00 g de Clorato de Calcio
0.50 g de Nitrato de Amonio
0.50 g de Carbonato de Amonio
0.05 g de Fosfato de Hierro
20.00 g de azúcar
12.00 g de agar-agar
1 litro de agua destilada (agua sin cloro)

Fórmula usada en Hawai

1 1/2 cucharada de té de emulsión de pescado
1 cucharada de té de peptona
12 g de agar-agar
20 g de azúcar
1 litro de agua destilada

Fórmula más Casera

3 cc de abono DynaGro 7-9-5 o 10-5-5
12.00 g de agar-agar
20.00 g de azúcar
2.000 g de carbón vegetal o carbón activado
5 tomates pera sin semillas (aquellos bien chiquitos)
150.00 ml de agua de coco
40.00 g de banana (mas o menos media banana)
800 ml de agua destilada

Nota: En las fórmulas con Tiamina, los comprimidos de vitamina B1 (conocido normalmente por Benerva) puede ser substituido por complejos polivitamínicos Teragram M o Supradyn.

En todos los casos con gelatina, primero se pesan y se dejan preparados los compuestos químicos con las cantidades correctas. Después se pone el agua destilada adentro de una olla de vidrio, esmaltada o revestida de teflón a calentar. Cuando está a punto de hervir (pero sin que esto ocurra) se colocan todos los componentes adentro y se mezcla utilizando una cuchara de madera o de plástico. Se revuelve un poco para que se disuelvan todos los productos, se apaga el fuego y se reparte el preparado en los frascos.
Cada frasco debe recibir en el fondo una cantidad de preparado de aproximadamente 1 centímetro (50 ml). Por cada litro de agua se preparan poco mas o menos 20 frascos. Se tapan los frascos y se prosigue con la esterilización.
Todas la fórmulas funcionan bien siempre que pH se encuentre dentro de la faja ácida de 4.8 a 5.0, no olvidar de medirlo siempre con la mezcla caliente. Nota: Las fórmulas con tomate ya tienen el pH adecuado. Una de las fórmulas más usadas es la de tomate con plátano.

 

Re: In vitro: 1-Preparacion del medio de cultivo.

Como bien ha explicado nuestro amigo ivan (muchas gracias ), tienes que polinizar a tu plantas, esperar sus correspondientes meses de embarazo...y luego a multiplicar orquideas como descerebrados mentales!!!

Tambien es cierto que existen muchas formulas (cada una diferente de la otra) pero si nos fijamos casi todas tienen un pequeño porcentaje de agar-agar.

Saludos!

Carlos.

 

Re: In vitro: 1-Preparacion del medio de cultivo.

Estupendo reportaje!! y además está muy interesante todo el post!! mucha suerte!!