In vitro a modo de prueba

Tema en 'Cultivo in vitro de orquídeas' comenzado por silvia grillo, 20/4/08.

  1. proximamente enviare al foro las experiencias que hicimos IN VITRO Elena Mari y yo con el resultado de tres frascos que han germinado.
    el 23 de octubre del año 2007 , ella yo nos juntamos para preparar la formula para germinar las semillas de orquideas, lamentablemente , de este preceso no tenemos fotos , pero haremos el paso a paso


    5 tomates chicos, sin semillas
    1/2 banana
    20 grs. de azucar
    esto lo licuamos

    calentamos el agua destilada
     
  2. Re: in vitro

    despues de calentar el agua destilada 1 litro
    le agregamos
    el licuado
    3 cm3 de abono foliar
    10 grs. de agar agar
    10 grs. de carbon
    1 pastilla de becozym Vitamna B

    bien esta es nuestra formula

    antes de poner el medio en los frascos , los rociamos con jardigon ( anti hongo.

    para germinar, nosotros como no teniamos camara esteril, optamos por el metodo de la jerengilla,
    es por ello que usamos frascos de mermelada ( esos de vidrio con tapa de metal) lavados y enjuagados con lavandina

    entonces perforamos las tapas de los frascos con una mecha de la medida de la jeringa, cerramos los frascos con las tapas , le pusimos a cada agujero de un tapon con algodon humedecido en alcohol, cocinamos en la olla a presion, 15 "a partir del pitido ( de la olla )

    los dejamos enfriar

    sacamos los frascos de la olla
    les pasamos alcohol por las tapas y sellamos con un papel film
    guardamos los frascos en un mueble , a oscuras por 7 dias , para ver si el medio actuaba normalmente.
     
  3. marimau

    marimau

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    Re: in vitro a modo de prueba

    y que mas ,que mas que eso me interesa mucho ...sigue contando :11risotada: :11risotada:
     
  4. javeduve

    javeduve Javeduve

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    Re: in vitro

    Silvia
    Muchísimas gracias por compartir tus experiencias, quisiera preguntarte algunos detalles sobre lo explicado.
    1) Tres cm3 de abono foliar, nos pudieras decir la composición del abono (N,P,K)
    2) Cuando mencionas que perforaste las tapas metálicas de los frascos con una mecha a la medida de la jeringa, me imagino que te refieres a una broca de taladro con un diámetro igual al de la aguja de la jeringa.
    3) le pusimos a cada agujero de un tapón con algodón humedecido en alcohol, me gustaría que ampliaras este detalle, si tienes una fotografía seria fantástico.
    4) cerramos los frascos con las tapas, quieres decir que antes de colocar en la olla cerraron los frascos con las tapas completamente o parcialmente por la razón de que la presión puede romper los frascos o es suficiente con el orificio en la tapa.
    5) Les pasamos alcohol por las tapas y sellamos con un papel film, te refieres a limpiar las tapas exteriormente, como lo hicieron, con atomizador ó ?

    Perdona las preguntas pero los detalles hacen la diferencia entre el éxito o el fracaso.
    javeduve
     
  5. JOHNNIE WALKER

    JOHNNIE WALKER Deleted

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    Re: in vitro a modo de prueba

    wow silvia que interesante y gracias por compartir estos metodos de in vitro, una pregunta? cuanto tiempo demoro en germinar las semillitas?
    gracias
     
  6. Re: in vitro a modo de prueba

    1) Tres cm3 de abono foliar, nos pudieras decir la composición del abono (N,P,K)
    1")los 3 cm3 fueron de un abono balancaeado 2)

    2) Cuando mencionas que perforaste las tapas metálicas de los frascos con una mecha a la medida de la jeringa, me imagino que te refieres a una broca de taladro con un diámetro igual al de la aguja de la jeringa.

    2" )no de la aguja de la jeringa , sino del cilindro de la jeringa, donde calzas la aguja.

    3) le pusimos a cada agujero de un tapón con algodón humedecido en alcohol, me gustaría que ampliaras este detalle, si tienes una fotografía seria fantástico.

    3") lamentablemente no sacamos fotos , solo tenemos el resultado, imaginate en la tapa un agujero de 2mm. mas o menos, al que hicimos pequeños taponcitos de algodon humedecidos en alcohol

    4) cerramos los frascos con las tapas, quieres decir que antes de colocar en la olla, cerraron los frascos con las tapas completamente, o parcialmente por la razón de que la presión puede romper los frascos, o es suficiente con el orificio en la tapa.

    4")cerramos los frascos, definitivamente porque sabiamos que por mucho tiempo, los mismos no se iban a abrir, para ser mas clara no presentamos los frascos con las tapas, los cerramos, son frascos de vidrio de mermelada que ya fueron previamente cocidos ... eso te asegura que no se rompe

    5) Les pasamos alcohol por las tapas y sellamos con un papel film, te refieres a limpiar las tapas exteriormente, como lo hicieron, con atomizador ó ?

    5" ) despues de sacarlos de la olla a presion , hicimos cuadraditos de papel metalico, todo fue desinfectado con alcohol en gel, y luego le pusimos un papel film , por encima, esto lo hicimos para que no entraran , germenes , virus o bacterias, por el agujerito que tapomos con alcohol

    pero esto es si hicieras el metodo de la jeringuilla, que no te lo aconsejo, en cambio si hacieras el de la camara esteril , tenes mas asepsia , porque te evitas de perforar las tapas de los frascos .

    por otra parte queria decirte que con 1 litro de agua destilada, mas los componentes, llenarias , no se pero de 25 a 28 frascos , calculo mas o menos asi que cuando prepares tu material Tu Javier veras de reducir las cantidades, de acuerdo al la proporciones indicadas
    una sugerencia , " no pongas los huevos en la misma canasta " divide por lo menos en tres tus semillas de cada variedad.

    ves este es otro error que cometimos

    me olvidaba decirte lo obvio todos los materiales empleados , fueron desinfectados a la llama o con alcohol, incluso cada tanto nos pasabamos alcohol por las manos que tenian guantes de cirugia.


    cariños Silvia

    hasta la proxima
     
  7. Re: in vitro a modo de prueba

    ahora te pregunto yo Javier

    te has conseguido la camara esteril ???,

    esto lo puedes cotejas con el excelente trabajo que hizo Monse ( OLIVIA ) incluyendo las fotografias... tema a que a nosotros nos falto pero alli esta explicado el paso a paso,

    tenes tambien , la manera de hacerte una camra esteril. pienso que es mas facil, porque el metodo de la jeringuilla , que de tanto lavar y desinfectar semillas, quedas estresado. recibe mi cariño
    Silvia
     
  8. yea

    yea orquidácea

    Re: in vitro a modo de prueba

    Gracias por hacernos saber de tu experimento. No sería igual, en vez de la tapa, tapar los frascos bien con papel de aluminio y asi es más facil perforar?
    He visto muchos frascos in vitro tapados con papel de aluminio.
     
  9. javeduve

    javeduve Javeduve

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    Re: in vitro a modo de prueba

    Silvia
    Maravillosa tu explicación.
    Nos ayudaría muchísimo las fotografías de tus plántulas actualmente.
    En el momento no tengo la cámara estéril pero voy a conseguirla, trataré de ubicar el post de Monse (OLIVIA).
    Un abrazo
    Javeduve
     
  10. nicoli

    nicoli

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    Re: in vitro a modo de prueba

    Magnífico trabajo Silvia!...:52aleluya:

    Y gracias por las lecciones!....muy pronto muchos de aqui vamos a reproducir nuestras propias semillas:11risotada:., Justo estaba recopilando material para esto, ya tengo casi todo menos la cámara de esterilización....donde específicamente la podría conseguir?....

    Saludos!:beso:
     
  11. Re: in vitro a modo de prueba

    Yea , Javier y Nicoli

    esta la primera parte de la experiencia, ahora les voy a comentar la 2 parte ,hasta llegar a las bebes, creo que podre explicarles lo 2 metodos y tambien poner la foto de una camara esteril.

    les pido un poquito de paciencia y poco a poco, les ire contestando las preguntan que surgieran.

    trato de escribirles en manera sencilla , porque es mas facil , cuando yo lo hice busque , indague de todo material que pasaba por mis manos , ahora de esta manera lo podran hacer , sin la necesidad de recabar datos de aqui y de alla.

    me falta agregar que cuando se ponen los frasco en la olla a presion se pone tambien agua destilada, digamos 1/2. litro, o poco menos en otro frasco, para evitar la contaminacion en el ultimo enjuague de las semillas
    que tambien se guardo con los frascos y el medio.

    cariños Silvia
     
  12. SAMAI

    SAMAI

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    Re: in vitro a modo de prueba

    Silvia: que bueno la experiencia.
    Te comento que el 03/03/08 hice un experimento parecido con semillas de Phalaenopsis, de 5 frascos que sembre me quedaron 2. De momento nada de alfombra verde ni nada.
    Solo note un ligero abultamiento de las semillas.
    Espero la 2ª parte.
    Slds.. y gracias por compartirlo.
     
  13. JOHNNIE WALKER

    JOHNNIE WALKER Deleted

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    Re: in vitro a modo de prueba

    este es un medio germinatuvo??? o se quedan aqui hasta que esten listas para salir???
     
  14. Re: in vitro a modo de prueba

    Samai querida.

    te comento que las primeras semillas germinadas, que nosotras vimos ( protocornos ) ( si no me equivoco ) unas bolitas verdes mas chiquitas que una cabeza de alfiler, recien fue a los tres meses, otras a los 6 meses y otra esta por despuntar , lo que indica que tambien, la germinacion de cada semilla es diferente a otra.

    te felicito por el exito !!!:52aleluya: :52aleluya: :52aleluya:
    suerte Silvia
     
  15. SAMAI

    SAMAI

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    Asuncion-Paraguay Clima tropical
    Re: in vitro a modo de prueba

    Ok, gracias por tu aclaracion, y...... lo unico que me queda es esperar
    Slds..
     
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