Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Marlo gracias por el dato.
No me he olvidado de lo tuyo.
Te envío un privado y te cuento.

Saludos..

Ivana.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

¡Hola Montsera!
Tengo varias preguntas no sé si puedas ayudarme:

· ¿Esterilizaste los frascos en la olla exprés con el medio de cultivo dentro de ellos?
· ¿En donde los colocaste para que se enfriaran?
· Los 5 o 6 días que esperaste para poner las semillas ¿en donde se encontraban los frascos? En la cámara de flujo laminar o en el exterior.
· ¿Limpiaste las semillas antes de colocarlas?
· ¿Cómo colocaste las semillas, dentro o fuera de la cámara?
· ¿Destapabas alguna vez la cámara de flujo laminar?
· ¿Qué hay dentro de la cámara aparte de los frascos y que hacías mientras los frascos se encontraban allí dentro?
· ¿Limpiabas los frascos mientras se encontraban dentro de la cámara?
· ¿Después de cuánto tiempo sacaste los frascos de la cámara?

Espero q no te desesperes al contestar mis preguntas, mil disculpas, pero la verdad me pareció muy interesante tu post y me gustaría realizar ese proyecto también; pues déjame decirte q tengo una 20 capsulas de semillas que esperan germinar.

¡FELICIDADES!

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola Oscar:

¿Esterilizaste los frascos en la olla exprés con el medio de cultivo dentro de ellos? Sí

En donde los colocaste para que se enfriaran? En la mesa de la cocina, pero con un trapo o una madera debajo para que no se rompieran con el cambio de temperatura

Los 5 o 6 días que esperaste para poner las semillas ¿en donde se encontraban los frascos? En la cámara de flujo laminar o en el exterior. En un armario normal

¿Limpiaste las semillas antes de colocarlas? Sí, puedes ver como aquí http://orquideoteca.blogspot.com/2009/06/esterilizacion-de-semillas-metodo.html

¿Cómo colocaste las semillas, dentro o fuera de la cámara? Dentro de la caja.

¿Destapabas alguna vez la cámara de flujo laminar? , Sí para sacar unos frascos y meter otros, pero si destapas la caja tienes que esperar un rato hasta que todo lo de dentro vuelve a estar esteril con el rociado de lejía.

· ¿Qué hay dentro de la cámara aparte de los frascos y que hacías mientras los frascos se encontraban allí dentro? Frascos las semillas, unas pinzas, papel de aluminio para tapar los frascos (ese papel ya no lo pogo dentro) y lejía

· ¿Limpiabas los frascos mientras se encontraban dentro de la cámara? Los frascos dentro están desisfectados por el vapor de la lejía.

· ¿Después de cuánto tiempo sacaste los frascos de la cámara? Los saqué en cuanto las semillas estaban dentro y volvían a estar cerrados herméticamente.

Bienvenido y mucha suerte, espero que prosperen todas tus polinizaciones y te salga bien el invitro.

Un saludo,

Olivia

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Muchas gracias Olivia me sirvió mucho el que hayas contestado mis preguntas, pero me surgieron otras:

En si ¿la cámara de flujo laminar para qué sirve?, para que dentro de ella germinen las semillas hasta convertirse en plantas adultas, en un ambiente estéril o solo para que no se contaminen los frascos durante unos días y permanezcan estériles.

Y después de que ingresarte las semillas al frasco ¿no hay que volverlo a destapar hasta que las semillas se conviertan en plantas adultas?

Espero que ya sean las últimas preguntas para dejar de molestarte , pero no sabes cuánto valoro la información que me estas proporcionando.

Muchas Gracias

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Pobre Olivia. Perdona mi intromisión.


En si ¿la cámara de flujo laminar para qué sirve?, para que dentro de ella germinen las semillas hasta convertirse en plantas adultas, en un ambiente estéril o solo para que no se contaminen los frascos durante unos días y permanezcan estériles.

Solo sirve para plantar las semillas en los frascos, en un ambiente estéril. Después se sacan los frascos.

Y después de que ingresarte las semillas al frasco ¿no hay que volverlo a destapar hasta que las semillas se conviertan en plantas adultas?
No, los frascos hay que abrirlos, sacar los embriones y volverlos a plantar en otros frascos dentro de la cámara, porque generalmente en los frascos están muchos y se les acaba los nutrientes. Esto se hace antes de que le salgan las primeras raíces. Incluso sería buena volverlo a hacer de nuevo más adelante, antes de que crezcan mucho.

Saludos

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

No confundamos cámara estéril con campana de flujo laminar. La eficiencia de la primera se basa en su estanqueidad y en la correcta esterilización de su interior, ya sea por UVC, lejía, etc.
En una cabina de flujo laminar, la esterilidad se basa el aire filtrado por un filtro absoluto (HEPA), que atraviesa la zona de trabajo en régimen laminar (como lo haría una capa de agua por una superficie), de forma que no haya turbulencias. Esta última es mucho más eficiente.




Saludos

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a todos,

Gracias Francisco, yo no lo hubiera explicado mejor.

Troncotron, que bueno verte por aquí, tienes toda la razón, yo dí por supuesto que Oscar se refería a la caja estéril, aunque puso cámara.
Cómo van tus cultivos?

Un saludo,

Olivia

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a todos.

Hacia tiempo que no podia entrar por falta del mismo.
He vuelto a reeler el post (que no es pequeño jaja) para no perderme nada.

Olivia, ya hice la plantacion de las semillas que me mandaste, y aunque puse todo el empeño del que soy capaz, creo que no soy la persona mas indicada para realizar todo el proceso sin que mis manazas tropiezen con algo.

Los frascos despues de la siembra, llevan 2 meses totalmente esteriles pero no se ve absolutamente nada. Sin evolucion ninguna. Parece como si no hubiese sembrado mas que aire .

Alguna cosa debo haber hecho mal., y la pregunta es ¿que?. Y la respuesta, mas sencilla todavia. Ni idea.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola Kirikiño,
Al parecer las semillas no han estado preparadas, puedes que no han estado maduras, no habrás metido en el autoclave con semillas y todo?
En mi caso, preparé 6 envases, los cuales 3 las pasé a donde están mis orquídeas, al parecer se elevó la temperatura, creo que tres envases los he perdido.
Las otras 3 están en buenas condiciones, tienen 5 semanas y se ven a simple vista algunos abultamientos que sin duda son los protocormos. estos frascos están a una temperatura aprox de 22 a 24 °C, están en un pasadizo techado con calamina transparente, ahora instalé un foco que prolongará hasta 16 horas de luz, 12 naturales y 4 artificiales. Voy a ver cómo evoluciona.
Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a todos,

Andoni, descartando que las semillas no son viables, puesto que las mismas del mismo lote han germinado, podemos pensar en que o en el peor de los casos se han quemado en la esterilización o en el mejor, como hace frío aun no han germinado.
No desesperes, aún pueden hacerlo, espera un poco a ver si con el calorcito empiezan a despertar.

Manzano, seguro que evolucionan bien, ya nos pondrás nuevas fotos.

Un saludo a todos

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Yo creo que va a ser la esterilizacion. Las prepare por el metodo de la jeringuilla, y espere unos diez minutos como tu explicates, pero como era la primera vez que lo hacia, tal vez me lie y prepare demasiadas a la vez. Es lo que tiene el ser tan ansioso .
La proxima vez ire con mas cuidado y hare menos cantidad.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

AYUDA??


Que puedo hacer, no se si recuerden que hace tiempo les comente que de emergencia plante las semillas de una capsula verde que seria una hibridacion pues creo que le faltava madurar despues de todo y durante los ultyimos dias me ha gustado mucho los resultados ya que la unica semilla que se dio esta creciendo muy rapido, es de la fecha del 7 de enero de este año y hasta hoy tiene 1 milimetro aproximadamente y esta verdesita, aparte la he checado con lupa y la veo que se desarrolla muy bien, pero surguio un problema al otro lado contrario del mismo frasco salio una lama blanca que se empezo a extender por lo que trate de quitarla pero en ves de eso SALIO PEOR, ASI QUE QUIERO QUE ME DIGAN COMO LE PUEDO HACER LARA REALIZAR EL CAMBIO DE ESTA PEQUEÑA A OTRO FRASCO QUE TENGO QUE HACER POR QUE ESO NUNCA LO HE REALIZADO Y APARTE SERIA UNA LASTIMA PERDER A MI PRIMER EJEMPLAR HIBRIDO Y UNICO ENTRE ROSSI X LAELEA!!!!!!

POR FAVOR REQUIERO RESPUESTA YO ANDO LEJOS PERO LLEGO DE MADRUGADA A TLAXCALA OSEA MI CASA PARA VER HACER DE UNA VES LO QUE TENGA QUE HACER!!! ANTES DE QUE PASE A MEJOR VIDA MI SEMILLA!!!

Y tiene que ser ya por que solo tengo hoy y mañana antes de internarme no quiero perder mas tiempo para salvarle!!!! y no pierda esta BB.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

En ocasiones me ha sucedido lo mismo. Si el hongo ha echado esporas, malo. Lo único que me ha ido bien (probé con desisfección con lejía, con agua oxigenada y con fungicida) ha sido volver a la cámara esteril. Allí has de colocar una pequeña cuchara desinfectada, un tarro sin contaminar, un mechero cualquiera y el frasco contaminado. Antes de desinfectar la cámara, antes de la vaporización del alcohol, has de quemar la cuchara con la llama del mechero, dentro de la cámara (procura no ennegrecerla. Si sucede has de limpierla con algodón estéril o con una gasa esteril, dentro de la cámara). A continuación abre los dos frascos y coge del contaminado la planta, con la cuchara, sin tocar el hongo. Deposita la planta, con parte del medio que habrás arracado con ella, en el frasco sin contaminar. Espera unos días a ver que pasa y cruza los dedos. Un saludo.

PD. No te equivoques, no se te ocurra encender el mechero después de haber pulverizado el alcohol.-

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

HAY GRACIAS, GRACIAS, CRACIAS HOY MISMO LO HAGO CLARO SERIA COMO A LAS TRES DE MA MAÑANA QUE ESTE LLEGANDO A MI CASA, PERO SIVE DE QUE MIENTRAS ME RECUPERO DE MI INTERVENCION PARA VER QUE PASO DESPUES, REALMETE AGRADECO LA AYUDA MIL GRACIAS.......................

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a todos! les adjunto un par de fotos para que me digan si es que el frasco está contaminado o no. Las semillas se ven bien, pero el líquido que entró al frasco con las mísmas se ha puesto medio blancuzco. Yo las esterilicé dentro de la cámara estéril con la fórmula del agua oxigenada de Olivia.

Las temperaturas aquí son muy altas ahora. Cuando está el tuvo de luz prendido rondan los 30, 32º y han llegado a los 34º, quizás eso tenga que ver. Igualmente las semillas se ven bien, hasta medio verdecitas algunas.













Bueno espero las opiniones de ustedes.

Gracias..

Cariños a todos..


Ivana.