Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

No creo que sea una exageración usar 4 pastillas de B1 por litro de medio para el cultivo in-vitro, ya que la vitamina B1 se degrada con el calor y por tanto al esterilizar los frascos en una olla, prácticamente el 90% de B1 desaparece, quedando una mínima parte en el medio. En pulverizaciones foliares y riegos sí es cierto que se usa 1 pastilla por cada 3 litros de agua, pero porque no pierde su efectividad.

Un saludo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola, a continuación mi punto de vista, porque seguimos enfrascandonos y reincidiendo en algunos detalles que ya estan resueltos. Sólo espero no molestar a nadie con mi comentario.

La pregunta obligada para Luak:

¿Tienes las condiciones adecuadas de luz, temperatura y humedad para tu cultivo in vitro?
Si es así, descartamos estos factores del enegrecimiento/vitrificación/quemaduras de las plántulas.

¿Que cantidades estas utilizando de los compuestos químicos o naturales en tu medio de siembra?

Si sigues al pie de la letra, las recetas caseras, encontrarás un millón de variantes y no todas funcionan o no todas dan buenos resultados.

¿Que funciona? ¿Cuál es la cantidad adecuada?

Cuando se trata de fórmulas/recetas, cultivo de plantas, .... etc. Muchos de nosotros seguimos actuando como simples aficionados.
Tenemos acceso a tanta información confiable y lo irónico es que no todos consultamos esa información tan valiosa o si la leemos, lo hacemos entre líneas. Entendemos pero no comprendemos lo que estamos leyendo. Lo peor de todo es que añadimos más variables 'incontrolables' a nuestros medios de siembra.

Todos podemos hablar desde nuestros referentes empíricos, pero cuando hay bases publicadas que sustentan investigaciones, trabajos, productos elaborados que funcionan, lo lógico es irse por esas bases escritas bien fundamentadas y olvidarnos de empirismos.

Ahora bien, después de tanto blablabla, a continuación un fragmento de la fórmula de Murashige & Skoog que puedes encontrar en Wikipedia ( http://en.wikipedia.org/wiki/Murashige_and_Skoog_medium):

Vitamins and organics

• i-Inositol 100 mg/l
• Niacin 0.5 mg/l (Niacina, vitamina B3 ó ácido nicotínico)
  
• Pyridoxine · HCl 0.5 mg/l (Cloruro de Piridóxina, Vitamina B6)
  
• Thiamine · HCl 0.1 mg/l (Cloruro de Tiamina, vitamina B1)
  
• IAA 1–30 mg/l
• Kinetin 0.04–10 mg/l
• Glycine (recrystallized) 2.0 mg/l
• Edamine S 1.0 g/l
• Sucrose 30 g/l
• Agar 10 g/l

El frágmento de la fórmula anterior se emplea principalmente para cultivo de tejidos, pero las vítaminas y sus cantidades en peso son las adecuadas. Lee con detenimiento la etiqueta del frasco de las vitaminas que utilizas y revisa las cantidades en mg, con esto te darás cuenta cuantas pastillas de vítaminas necesitas emplear.

Si tu empleas cantidades exageradas, el problema es que desbalanceas el contenido nutritivo de tu medio.
Es algo así como si en tu dieta personal consumieras diariamente por ejemplo 10 piezas de pan ó 2 kilos de carne y tan sólo 5 gramos de verdura. Piensa en las consecuencias que esto puede desencadenar al corto plazo. Lo mismo le sucede a las plántulas en los medios de cultivo.

Si analizas las fotos que estas publicando de tu cultivo in vitro, te daras cuenta que tus plántulas son enanas, y las raíces son gigantes. Es más los pseudobulbos ni siquiera estan medianamente fdesarrollados y las pántulas ya tienen enormes raíces. Lógicamente existe un desbalance nutricional. No te preocupes por ello, yo pasé por el mismo error hace tiempo. ]El chiste es que corrijas errores en tus próximas siembras/replantes.

Yo se que no todos tenemos acceso a medios de cultivo preparados con compuestos químicamente puros, que seria lo ideal, ya sea por el costo o por lo complicado que resulta conseguirlos o prepararlos (y por consiguiente, pesarlos), pero podemos intentar balancear nuestros medios de siembra 'caseros' de una forma más equilibrada sin exagerar en las cantidades.

Yo desde hace mucho tiempo atrás empleo fertilizante foliar para mis medios de siembra (seguí las recomendaciones de la fórmula del Hyponex), adicionado con pulpa de frutas. El tomate no va conmigo al menos en las cantidades tan exageradas que muchos utilizan. Las vitaminas y otros compuestos los añado con bastante discreción (vitaminas por ejemplo) y obtengo resultados bastante aceptables, mas no excelentes.
Como es lógico, no me germinan todas las semillas, pero tampoco necesito mil plantas de un monocultivo. Sólo me germinan desde mi punto de vista, las semillas mejor desarrolladas, es decir, las más fuertes y eso es lo que yo busco.
El crecimiento de plántulas es aceptable y la producción de raíces el adecuado y las plantas se adaptan rápidamente a las condiciones ambientales naturales o de invernadero cuando salen del frasco.

De mis cultivos in vitro actualmente rara vez tengo 1 frasco contaminado de los 20 que siembro en una sola tanda y lo mismo sucede con el replante.
No utilizo campanas de flujo laminar ni cajas de siembra estériles. Mi método/procedimiento es bastante artesanal y similar en muchos aspectos a lo que otros colegas ya han publicado en éste hilo anteriormente.

Los resultados finales de algunas siembras:


Rhynchonia Mercedes 'Caprichosa' (Rhynchostele cervantesii x Miltonia Goodale Moir 'Golden Wonder)
Siembra de semillas: Mediados de los 90's
Primera floración: 2005




Lc Omen (Cattleya purpurata 'tipo' x Laelia autumnalis 'atrorubens') Año de siembra de semillas: Finales de los 90's
Primera floración: 2006.
Noten los primeros speudobulbos secos sin hojas, signos y pruebas cuando la planta salio del frasco:



El siguiente ejemplar en particular fue el más prolífico en cuanto a crecimiento y desarrollo. Mientras las plantas en general dentro del frasco median 1 cm, ésta planta media 2cm.





Otra variedad de la Lc Omen, que con el calor seco la flor se retuerce. La ventaja de este ejemplar es que las flores tienen un color bastante cercano al coeruleo, aunque no se aprecie en la foto. Una planta similar en cuanto a flores 'retorcidas' de esta cruza esta en proceso de formación de cápsula. Voy a tratar de enderezar los pétalos y sépalos con nuevos genes de otro género.



Año: 2013
Mis nuevas siembras de híbridos complejos, donde estoy batallando con la infertilidad/esterilidad de algunas cruzas complejas (no poliploídes).



Espero esto sirva de aliciente para todos y no se den por vencidos, sólo afinen y mejoren sus métodos de siembra, eso es todo.

Si algún aficionado como yo tiene experiencia en Poliploídia y cultivo de meristemos (métodos casero de preferencia), me gustaria intercambiar información por MP. Estoy comenzando mis primeros experimentos en ésta área tan interesante.

Y para los que necesiten información ampliada en fórmulas químicas probadas y comprobadas para medios de siembra, aunque el apartado hable de cultivo de tejidos, sirve perfectamente para siembra de semillas:

http://webapp.ciat.cgiar.org/biotechnology/cultivo_tejidos/apendiceF.pdf

Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Gerardin37 entiendo tu postura, para nada me molesto, al contrario, estoy muy agradecido con vuestras respuestas.

Las condiciones en las que tengo el cultivo:
Solo controlo la luz, les tengo puestos tubos growlux de 18w 16h de luz y 8 de oscuridad, la temperatura es la ambiental(entre19º/22º, aunque en estos proximos meses subira), excepto en invierno que les pongo una pequeña manta térmica. En cuanto a la humedad, me surge una duda, al ser botes herméticos ¿les afecta la humedad exterior o, te refieres a la humedad interior de los botes?

La fórmula que utilizo es la de platano y tomate(para germinar me funciona muy bien), el problema fue que para el repicado no respete cantidades e ingredientes.
FÓRMULA TOMATE Y PLÁTANO

40 g de plátano
100.0 ml de jugo de tomate
10.0 g de agar agar
20.0 g de azúcar
1.2 g de Tiamina
900 ml de agua destilada
te dejo una foto del armario(aún no esta terminado) donde las tengo, no se si en la parte de arriba que va llena de botes hasta arriba sera demasiado con dos tubos de luz.

Muchas gracias por la información....

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Luak,
Trata de que la temperatura no suba demasiado. Ese factor es crucial y raramente le prestamos atención. Al meter más tubos (sobre todo si trabajas en un armario) se calienta mucho el entormo pero la luz es muy necesaria para el correcto desarrollo de las plantas. Trata de mantener la temperatura por debajo de 25°C siempre.
Saludos!

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Gracias por el consejo Eliseo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Siempre surgen diferentes opiniones y puntos de vista por eso tome la decisión de ser parte del foro pero sin opinar para no crear polémicas porque creo que lo que cada quien aporta es su punto de vista.
Te comento estimado luak que lo que siempre importa es el resultado me atreví a opinar porque en una parte del proceso modificas tu medio para que tus plantas hechan raíces se hace con reguladores de crecimiento y al ver el tamaño de tus raíces y saber que hiciste para tener ese resultado se me hiso bien interesante una disculpa si te confundí con mi comentario no era mi intención

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra


Luak que bien que tomaste mi comentario como lo que es, una sugerencia/observación . Gracias.

Tus botes son cerrados, por lo tanto en este caso debemos excluir el apartado humedad exterior. Normalmente en laboratorios profesionales podrás ver un estricto control de humedad del medio ambiente donde se mantiene el material in vitro.
Para mi gusto tienes un cultivo 'perfecto' y como nos comenta eliseoteson, cuida la temperatura que es sumamente importante.

En mi caso, yo utilizo sólo papel aluminio para cubrir la boca del frasco y debo cuidar más la humedad, o al menos tratar de que el aluminio quede lo más apretado a la boca de la botella y de esta forma me olvido de la HR exterior.

Tu armario es excelente. No creo tengas problemas. Procura no alterar cantidades. En todo caso añade los compuestos que le hagan falta a tu medio de siembra para que sea más completo, más balanceado y veras que con cada siembra mejorarás tu cultivo.
Si tienes 2 tubos arriba y uno abajo, considero que deberías colocar las semillas recien sembradas en donde hay un sólo tubo y los replantes donde tienes los dos tubos. Las plántulas requieren más luz que los protocormos.

Yo acabo de recibir hace unas cuantas horas algunos frascos de Cattleyas que mi estimado amigo RobertoS. amablemene me envió desde Venezuela. Los frascos viajaron desde lejanas tierras Sudamericanas hasta México. Mil gracias Roberto, te lo agradezco como no tienes idea.

Roberto me comentó vía e-mail que en algunos frascos no se veían signos de desarrollo de raíces, a pesar de que el medio de cultivo él lo compra ya preparado.
El problema principal es la alta temperatura según me comentó (Muy arriba de los 31C, posiblemente 35C o más) .

Cuando la temperatura es muy alta, las plántulas no se desarrollan lo suficiente y quedan 'enanas' por la rápida maduración.
Algunas de mis plantulas in vitro ya han sufrido de este enanismo por calor. El grave problema con este detalle es que las plántulas tardan más tiempo en florecer, por el deficiente desarrollo.

Si se controla la temperatura a un nivel óptimo, se puede ahorrar alrededor de un año a año y medio en la floración.

Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Ruben no te preocupes como dices aqui estamos para dar nuestra experiencia y es normal incluso bueno que tengamos diferentes puntos de vista, gracias a tu comentario ya se que la b1 se degrada con la temperatura, con lo que en el fondo con todos los comentarios se aprende algo o al menos ese es mi caso.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Eliseo gracias por el consejo, lo malo es que aqui en verano hace mucho calor y tendre que ingeniarme algo para mantener esos 25º, imagino que sera con un pequeño ventilador...no se ya os contaré.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Gerardin37, de nuevo gracias por tan valiosa información, seguire tus consejos, como se suele decir de los errores se aprende, seré mas cuidadoso a la hora de hacer el medio y estudiare a fondo el tema de los nutrientes....

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Gerardin, no creo que nadie se deba de molestar por las opiniones y sugerencias que la gente expresamos ( a no ser que use palabras o tonos despectivos o insultantes), ya que creo que todos somos aficionados y puesto que aprendemos con el método de prueba/error, se agradece toda la ayuda que podamos ofrecer. No creo que nadie nazca sabiendo, por lo tanto todos debemos de pasar por ésta etapa de aprendizaje. Se trata de colaborar entre todos aportando nuestras experiencias, tanto buenas como malas, para no volver a cometer los mismos errores. Es lógico que la gente más experta proporcione más información que los que somos aficionados, y el simple hecho de atreverse con el cultivo in-vitro, merece un reconocimiento.

¡¡Sigamos preguntando dudas y aportando conocimientos!!

Un saludo a todos

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Gracias Netpolin,

Quiero compartir información que creo será del interés para muchos. Posiblemente algunos ya tengan conocimiento, pero para los que no, aquí lo describo:

Todos nos emocionamos cuando polinizamos una orquídea y nos imaginamos con tanto anhelo lo que obtendremos a futuro cuando nuestra plantita florezca por primera vez.
Desafortunadamente en la mayoría de los casos no tomamos en cuenta que algunas veces las plantas que propagamos de semillas verdes, podrían estar contaminadas de virus.

¿Cómo evitarlo?
Para empezar, puede ser díficil determinar si nuestra cruza en cuestión contiene algún virus agresivo que puede terminar con la vida de la planta.

En éste mismo foro, un par de personas (una persona que vive en España que posiblemente sea administrador del foro y otro que vive en México) me criticaron de forma ignorante por hablar de que en México tenemos virus que se propagan con las plantas que se venden comercialmente en viveros, o que las semillas que sembramos pueden llevar 'genes extraños'. ADN de virus.

Desde el mes de Junio del año pasado a la fecha he contabilizado un total de 130 plantas contagiadas por virus en México en diferentes estados del país y en diferentes colecciones privadas.
Aquí mismo en el foro, no recuerdo quién publico un Epidendrum René Marquez en Argentina, posiblemente contagiado con algún tipo de virus.

Con estos antecedentes creo conveniente SUGERIR, más no dar un consejo que son dos cosas distintas:

1.- Cuando realicen una polinización cruzada para obtener semillas, tengan siempre una división exclusiva para éste propósito. Nunca lo hagan con una planta madre de la cual no tienen una división. Si por algún motivo la planta sana se llega a contagiar de virus, siempre tendrán otra planta 'sana' de respaldo.

2.- Las cápsulas verdes tienen mayores posibilidades de germinación, pero también tienen casi un 100% de posibilidades de estar contagiadas de virus, siempre y cuando alguno de los progenitores esté contagiado. De esto hay mucha información en la WEB que pueden encontrar 'gogleando'.

Las cápsulas maduras no tienen este riesgo siempre y cuando las semillas secas y maduras se liberen de la cápsula abierta por ligeros golpes con las manos, nunca con el raspado con objetos para tratar de liberarlas.
Las semillas maduras contienen una ligera menor cantidad de semillas viables, pero son completamente seguras y libres de virus. Esto no lo afirmo yo, ya esta publicado en documentos en la WEB y en algunos libros que he leido.
Lo único con lo que tendrán que batallar es con el procedimiento para evitar la contaminacion por hongos/bacterias en la siembra.

3.- El realizar cruzas endogámicas, produce un debilitamiento genético en la progenie. Es mejor realizar polinización cruzada con plantas que no son hermanas o cruzas de padres/hijos o realizar autofecundación (cruzas 'selfed' ó lo que es lo mismo, 'por si mismas'.
Si lo hacen por que no tienen otra planta similar con la cual cruzar (en el caso de especies, no híbridos de género x género distinto ó especie x especie distinta), la autocruza es válida.

El procedimiento de siembra a partir de semillas secas lo comenzaron a adoptar algunos colegas aquí en México desde hace casi un año. Yo estoy sembrando semillas secas desde hace 4 años atrás y cada vez son más los adeptos que siguen este procedimiento por las razones arriba citadas.

Ahora bien. Desde mi punto de vista (se que algunos van a diferir), la fórmula del plátano y tomate y sus variantes junto con las vitaminas, ya deberían estar si no entendidas, por lo menos asimilada. Si alguien vuelve a preguntar como sembrar las semillas, lo vamos a mandar a leer éste hilo de principio a fin 10 veces. Yo mismo leí el hilo por completo (me tardé 2 semanas) para tratar de encontrar información útil y me encontré con buenas referencias y pude consultar en privado a varios miembros del foro a los cuales agradezco sus repuestas.

Y, aunque la información a continuación puede no ser del agrado de todos, creo muy pertinente mencionarla. Consultela, veanla, es muy interesante. Se trata de vídeos documentales, algo antigüos, pero por la información que contiene es de suma importancia para entender y quizá compreder como se comportan los genes en plantas y animales cuando se realizan cruces endogámicos y transgénicos:

1.- Perros de Pedigrí al descubierto, que lo pueden ver aquí:

http://www.youtube.com/watch?v=v7PmAEB6utA

2.- El mundo segun Monsanto:

http://www.youtube.com/watch?v=LdIkq6ecQGw

Si quieren más referencias visuales de los trabajos que han hecho algunos hibridizadores de orquídeas, vean los trabajos que han hecho algunos, como

Ned Nash, Leo Holguin, Rita Croters, Gordon Dillon, etc.

Especialmente vean los trabajos de Rolf Altenburg en Brasil:

http://www.floralia.com.br/sobre.html
http://www.delfinadearaujo.com/on/on18/paginas/hibridos2en.htm
http://www.delfinadearaujo.com/on/on09/paginas/mat1aeng.htm

Saludos y mucho éxito en sus siembras.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola a todos, he estado leyendo un poco sobre como corregir el ph de forma casera y creo que el limón, vinagre y carbonato calcico o carbonato de magnesio son los mas apropiados, ¿que me decis...cuales utilizais vosotros?
Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Yo uso sosa caustica y acido clorhídrico. Ambos se consiguen en cualquier droguería o supermercado, la sosa como desatascador y el clorhídrico como ácido muriático (clorhídrico al 10%). Ambos han de manipularse con mucha precaución.

Otra opción mas casera y menos peligrosa con ingredientes que todos tenemos en casa es el vinagre para bajar pH y el bicarbonato para subirlo.
Saludos

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Eliseo he leido que el bicarbonato sodico no es muy recomendable ya que no corrige el medio de forma estable, primero lo baja y luego lo sube y creo que tambien afecta a la dureza del agua. ¿tu lo has usado alguna vez?