Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Tema en 'Cultivo in vitro de orquídeas' comenzado por Monstera, 3/4/08.

  1. Monstera

    Monstera

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola arcangell, yo pongo el film por que sobretodo en los cambios de temperatura es posible que entre algo, además reciclo las tapas con lo que a veces no cierran perfectas.

    Gerardine, me comentaron una vez que el aluminio sin tapa producía cambios en el ph, te ha pasado?

    Saludos
     
  2. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Gracias Arcangell, detalles muy buenos, te envío correo en breve....

    Monstera: Desde que comencé las siembras, siempre utilicé papel aluminio como tapa y en un principio media la acidéz con papel PH, era demasiado metódico, pero como me di cuenta que no había gran variación o que ésta no era tan importante (en mi caso particular) como para afectar en gran medida germinación y crecimiento utilizando los medios caseros que preparaba (he probado con más de 20 formulaciones distintas, hasta que encontré un buen balance), prescindí de la medición del PH y no, realmente no hay mucha variación con el aluminio.

    Si éste cambio de PH llegase a suceder por el aluminio puede ser debido a algúna reacción química con los vapores del medio aunque realmente lo dudo, porque en todo caso el aluminio cambiaría a un color parduzco/negro, siempre y cuando no se sobrecaliente el aluminio que también es motivo para que cambie de color.

    Támpoco descartes, la alteración de la composición química de los reactivos empleados en el medio (orgánicos e inorgánicos), que se transforman con el calor al momento de esterilizar.
    Si no mal recuerdo, creo fué Arcangell quién comentó unas 2 ó 3 páginas atrás que el PH le variaba enormemente después de esterilizar el frasco y mi respuesta fué que eso se debía a la transformación en especial de todos los compuestos orgánicos por el calor y él no utilizó tapas de aluminio.

    El aluminio es muy versatil y económico aunque poco durable y pocas veces reciclabe para el propósito in vitro, pero si aprenden a manejarlo puede ser un buen aliado en la siembra y replante.

    Las tapas de la marca magenta son muy versátiles y más durables que el aluminio, pero aquí me ha sido imposible encontrar un distribuidor que venda tapas para frascos más grandes. Phytotechlab sólo tiene tapas para frascos Gerber y Sigma tiene lo mismo aunque a precios mas elevados.
    Los frascos gerber no van conmigo del todo porque solo sirven desde mi punto de vista, para germinación, pero no para replante final. Las plantulas adultas (en mi caso) generalmente superan el tamaño de frasco gerber la mayoría de las veces, por eso sigo 'casado' :smile: con el papel aluminio y frascos más grandes. En el futuro tendré que divorciarme del aluminio. :11risotada:

    Saludos.
    :5-okey::5-okey::5-okey:

     
  3. arcangell

    arcangell C. de Begonias y adeniums

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    La verdad es que no e notado cambios, pero hay que tener presente que el agua destilada como la des-ionizada por ser agentes oxidantes puros, en contato con el aluminio o tapas metalizas sin revestimiento de plástico provoca que las gotas de condensación oxiden el aluminio como el metal. después estas gotas al caer modifican el PH del medio superficial. el aluminio se descompone mas rápido que el metal hasta donde e leído. La oxidacion del aluminio es opaca y si alguien se a dado cuenta de que el aluminio al salir del autuclavado pierde brillo es por que a altas temperaturas pierde una capa protectora que se le aplica para que no descomponga los alimentos. La oxidacion del aluminio es a nivel microscopico y lenta, pero bastan una gota alteradas de oxido de aluminio para varias la superficie del medio que es donde estan las semillas. Si yo mido el medio de cultivo completo no encontrare variaciones pues solo afecta la superficie. como la mayoria hace las mediciones del PH con papel de ph, creeme que los cambio minimos no se notan. Me compre un medidor de ph electronico de laboratorio y creeme que por la presision de los resultados las escalas del papel varia en 0.5 mas.. o 0.5 menos. y cegun la literatura invitro que e leido.. esas diferencias hacen que las semillas o anden mas rapido o mas lento. germinaran igual, pero variara el tiempo. esa debe ser la razon por la cual a algunos les va mejor qeu otros en los medios de cultivo. En esto no estoy mencionando y considerando las variaciones de temperatura. Aclaro que mi experiencia con semillas de orquídea esta en pañales pues aun no consigo semillas. Solo e probado con semillas finas de otras especies y material orgánico de begonias.

    Ahora debo de de hacer una pequeña aclaración. comente mas atrás de la variación de ph despues del autoclavado, pero la verdad es que la medicion de el PH lo hice con laminas de papel. y la siguiente vez que lo hice con el electronico, por eso la variacion. Repeti el experimento abriendo un frasco y midiendo con papel y me dio el mismo ph que antes de autoclavar, pero el electronico sigui dando un valor diferente por ser mas exacto.
    Otro frasco que medi com el medidor electronico y despues de 5 dias abri el frasco que ya tenia explantes, habia variacion en el, pero de seguro por el agua que poseian los explantes al momento de la siempre, pero la diferencia no era mas de 0.1 o 0.2

    Ahora debo de de hacer una pequeña aclaración. comente mas atrás de la variación de ph despues del autoclavado, pero la verdad es que la medicion de el PH lo hice con laminas de papel. y la siguiente vez que lo hice con el electronico, por eso la variacion. Repeti el experimento abriendo un frasco y midiendo con papel y me dio el mismo ph que antes de autoclavar, pero el electronico sigui dando un valor diferente por ser mas exacto.
    Otro frasco que medi com el medidor electronico y despues de 5 dias abri el frasco que ya tenia explantes, habia variacion en el, pero de seguro por el agua que poseian los explantes al momento de la siempre, pero la diferencia no era mas de 0.1 o 0.2
    Pregunte a mi distribuidor por tapas magenta y se fabrica una tapa de 70mm de interior que es compatible con los frascos corrientes de litro y de medio litro que se usa en mermelada cacera. http://www.phytotechlab.com/detail.aspx?ID=804
    el distribuidor de mexico es
    Tropigen Servicios Y Asesoria
    Attn: Rafael F. Rivera-Bustamante
    Manchester Number 187
    Fracc. La Estancia, Col. Fovissste
    36616 Irapuato, GTO, Mexico
    Phone: 462-624-6474
    Fax: 462-625-5005
    E-mail: rafaelriverab@gmail.com
    E-mail: tropigen@prodigy.net.mx
     
  4. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Gracias por el dato y también por el e-mail Arcangell, en cuanto a las semillas esperaremos a que terminen las lluvias, ahorita no hay flores.

    Me acaban de comentar de alguien que vende las tapas magenta aquí en la capital a poco menos de un 1/3 del costo de Phytotechlab.
    Tropigen aumenta los precios segun su conveniencia y en algunos casos sale más caro que Sigma. Recordemos que estos materiales son de importación.
    También me han comentado de un fabricante local de esas tapas, pero tengo que investigar quién es, ya que el costo se reduciría aún más.

    En el caso del papel aluminio, les muestro algunas fotos y oxidación o no, Universidades en sus centros de investigación lo utilizan y lo curioso es que no veo problemas en los cultivos de tejidos ni de semillas.
     
  5. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Perdón pero presioné el botón equivocado.
    En el siguiente enlace estan las fotos:

    http://journeyofplant.blogspot.mx/

    Mi teoría es que el medio de cultivo debería ser muy ácido o muy alcalino para reaccionar de una forma tal que el aluminio interfiera con el cultivo.
    También el tiempo de esterilización tendría que ser muy largo para que se altere la composición química del medio y aquí dependería de cada quien.
    Yo en lo particular no he visto cambios en mis medios de cultivo utilizando papel aluminio, tanto esterilizando a presiones muy altas, como hasta por lapsos de 40 minutos. Las semillas siempre han germinado, utilizando tanto fertilizantes, como medio de Knudson C, comprado ya preparado.

    Esta es una imagen del laboratorio del Jardín Botánico de Atlanta, donde algunos frascos no tienen tapa debajo del papel aluminio.

    [​IMG]

    Y este es un cultivo casero de tejidos de Marihuana en alguna parte de Europa. Noten que también algunos frascos no tienen tapa debajo del papel aluminio. Es evidente por que se avista enroscado del vidrio donde embona la tapa (lado derecho e izquierdo).

    [​IMG]

    La siguiente empresa vende papel aluminio para uso en laboratorio:

    http://www.camlab.co.uk/aluminium-foil-large-roll-450mm-x-90m-p17627.aspx

    Y en su propaganda reza lo siguiente:

    "Suitable for a wide range of laboratory applications including the sealing of tubes and wrapping of columns/vessels. Supplied in a roll"

    No creo que ese aluminio tenga recubrimiento especial.


    Saludos :5-okey::5-okey::5-okey:
     
  6. gasrac

    gasrac aficionado

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Buenas tardes....
    No lo califico como un exito,pero ......al menos se ve algo de color:meparto:
    [​IMG].
    gracias a todos por sus aportes :5-okey: se aprende i mucho.
     
  7. Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra


    Claro que es un éxito!!!!!!!
    Esos son bebés (protocormos) en desarrollo.
    Felicidades. :52aleluya:

    ¿Qué medio de cultivo empleaste?

    ¿En cuanto tiempo notaste la germinación?

    Una sugerencia que me gustaría comentar.

    Así como tienes tus frascos, yo solía utilizar mucho medio para no desperdiciarlo. Pero con el tiempo me dí cuenta que las semillas requieren una delgada capa de medio para germinar, de .5 a 1 cm de medio a lo mucho y para el replante final puedes utilizar 1.5 cm de medio de cultivo
    Entre más medio utilices, es demasiado desperdicio (agar y químicos si los llegas a utilizar. A mi me ha costado trabajo quitarme éste mal hábito) y aunque el tomate no cueste mucho, hay que acostumbrarnos a emplear sólo lo que se necesita.
    Cuando prepares tu medio de cultivo, es mejor preparar cuando mucho 1/4 de litro, que puede ser suficiente para todos los frascos que puedan caber en la olla express en una sola etapa de esterilización.

    Suerte :5-okey:
     
  8. luak

    luak

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    al sur...
    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Enhorabuena Gasrac un pequeño gran exito......saludos:5-okey:
     
  9. gasrac

    gasrac aficionado

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Buenas noches
    gerardin37 el medio es el que da Monstera en la primera pag del hilo o sea el de tomate,de echo he segido los pasos lo mejor que he sabido, en cuanto el tiempo ,:icon_redface: es el unico bote que no tiene fecha(maldita ley de murfi)sin embargo casi podria asegurar que son de mi segundo intento en abril,creo ver movimiento en otros botes entonces confirmare la fecha,en lo referente a la cantidad de medio por bote tienes razon... se me fue la mano pero no tenia mas botes i pense que como mucho saldrian una o dos por bote i me dije... mejor le metes cantidad i asi te ahorras el replicado :11risotada: ,bromas aparte para la siguiente tanda tu consejo me servira de experiencia.
    Os seguire leyendo con atencion
     
  10. zarq_ii

    zarq_ii Wild possum!!

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola a todo también estoy de fiesta, tengo respuestas de germinación en 3 frascos, lo que he observado es que seguir la receta al pie de la letra no es muy conveniente, a menos que sean las formulas quimicas, yo en los medios solo he variado las cantidades de frutas (banana y tomate), que las he reducido al minimo, yo utilice solo una cucharada cafetera de c/u, ademas de utilizar carbon vegetal e aquí los resultados de 3 meses desde el enfrascado (14/Mar/13)!!:5-okey:

    [​IMG][​IMG]
    Guarianthe aureantica

    [​IMG][​IMG]
    Oncidium Ornithorincum​

    También cabe destacar que Geradin tiene mucha razón, las semillas germinan mucho más rapido con poco medio de cultivo (porque penetra más luz)!!


    Y para finalizar Agradecer Monstera, quien es pionera en esto del cultivo casero, gracias a Monstera me animé a realizar mis cultivos, ahora no adelantar visperas y mostrar los avances futuros!! MIL GRACIAS MONSTERA!!:5-okey:

    SALUDOS!!
     
  11. Monstera

    Monstera

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Gracias a vosotros. Yo sólo puse la semilla del post vosotros lo habeis hecho crecer con vuetras experiencias, felicidades a todos.

    En relación a las medidas y cantidades cada uno teneis que probar y modificar al gusto. La primera es una fórmula básica, que funciona, yo la he usado durante años. Está claro también que no es precisa , puesto que los ingredientes que usemos unos y otros en una y otra punta del mundo no son iguales. También está claro que hay formulas comerciales que para germinación tienes mejores tasas, pero con esa fórmula he tenido germinacione stan buenas que he tenido que tirar botes para hacer espacio.

    Recordad que la germinación también depende mucho de las semillas en si y de su correcta esterilización.

    Saludos a todos y no pareis de poner fotos que me encanta verlas. Voy a intentar subir alguna desde el móvil.
     
  12. carlosc 1953

    carlosc 1953

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    para esterilizar varas de PHALAENOPSIS(in vitro) con agua oxigenada,(3 partes de agua oxigenada+7 partes de agua destilada-15 minutos.)El agua oxigenada de aqui dice 3%,mi pregunta es ,la tengo que diluier 3 partes +7 partes o directamente como viene del frasco 3% desde ya muchas gracias
     
  13. leo_v

    leo_v Zygostates alleniana

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Hola! Cómo están!

    Estoy empezando con el invitro y tengo una duda: a partir de qué momento es necesario darle luz a las semillas? mientras no tengan clorofila no necesitan no? He leído hasta la página 30 de este hilo y creo no haber visto la respuesta, si es una pregunta repetida pido disculpas:icon_rolleyes:

    Saludos y gracias!
     
  14. Loborios

    Loborios

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra



    Hola:

    si no les das luz no pueden producir clorofila. Yo las expongo unas horas depués del plantado.

    Un saludo
     
  15. leo_v

    leo_v Zygostates alleniana

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    Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

    Gracias por responder Loborios:5-okey: . Ya había leído que la luz estimula la formación de clorofila, pero también leí que las semillas de muchas orquídeas germinan mejor sin luz:icon_rolleyes: . Por eso pregunto si alguien sabe en qué momento pero si todos lo hacen desde el principio ya se la prendo.:11risotada:

    Saludos!