Cultivo in vitro

Hola!!! novata y pensando en intentarlo!!! me quedo boquiabierta... con 1 (una) semilla??? 4 meses??? usaste hormonas? 0 sólo la receta con MS del comienzo??? Una pregunta, algún otro medio casero -SIN MS- que produzca los mismos resultados??? saludos!!!

 

Sólo utilice el MS sin hormonas y está a años luz comparado con los medios caseros.

 

felicidades por el hilo, Acourtia, por la maestría con la que lo moderas, y gracias por todos los conocimientos vertidos desinteresadamente (y por la paciencia, a veces), aunque supongo que será gratificante ver como todos esos conocimentos y ese buén rollo que vas sembrando fructifican por todo el mundo...

soy una especie de escultor y mi trabajo anda siempre rondando entre lo vivo y lo automático, explorando las fronteras entre lo natural y lo artificial. Si te interesa, puedo mandarte el link de mi web.
El cultivo in vitro es un ejemplo de como una actividad natural se ve "artificializada" en el sentido de pasar a controlar un ser vivo en todos sus parametros de una forma extrema, aislándolo del mundo en una burbuja estéril en la que podemos observarlo y hacerlo "funcionar" igual que haríamos con un bonito reloj mecánico o con un delicado autómata.
Me parece muy evocador y pretendo usar esta técnica en mis trabajos.
Hace ya mucho que vengo planteándome el utilizar material vivo en mis creaciones, al igual que hacen algunos colegas que utilizan peces o insectos, para poblar algún tipo de ambiente artificial de telepresencia o de realidad aumentada pero siempre me ha detenido el aspecto ético del asunto (dicho de otra manera: me siento mal ante la idea de confinar a un animalillo, sea del tamaño que sea y por la razón que sea).
Lo intenté con hongos en cajas petri, me construí una glove box y mas o menos sé como va el tema de la esterilización y asi, pero lo abandone por que los resultados no eran satisfactorios mas allá del concepto. Lo que nunca pensé es que esa misma técnica pudiese aplicarse a plantas, especialmente a las mas delicadas como orquídeas y carnívoras.

Quiero construir una especie de célula autónoma de cultivo, que básicamente es un tarro como los tuyos pero con una luz LED adosada en la tapa.
Preguntas:
-fotoperiodo? pueden tenerse 24 / 7? (teniendo en cuenta que la luz será de un solo LED de alta luminosidad)
-he visto que una biblys te ha florecido en el tarro. Quiere esto decir que una planta puede completar todo su ciclo dentro del frasco? Si la dejas crece y crece?
-los frascos son realmente autosuficientes? (aparte de la luz, claro); el mismo aire y agua que quedan dentro al cerrar el bote son suficientes para toda la vida de la planta?
-he visto que los tiempos de germinación de carnívoras son muy grandes comparados con los de otras plantas.
Qué tipo de especies, a ser posible de pequeño tamaño y con flor, me recomendarías para mayor rapidez?
-has usado alguna vez tubos de ensayo en lugar de botes? quiero probar muchas y eso hace mas eficiente la labor.

gracias de antemano y un saludo muy cordial para todos

 

Hola, ¡qué tal mono? Perdón por meterme, pero ¿cuáles son las características del LED? Porque si es un LED en escala de miliamperes y con no sé 3.5 V no creo que vaya a dar resultados, quizá se requiera más Potencia.
Siempre he querido hacer la prueba con un LED a 12V, 2A con 20W de potencia disipada, que me ofrece 2100 Lumenes por W, un rango de luminosidad de 140º que creo que bastarán para abarcar lo que necesito alumbrar y me ofrece también de 4000 a 6000 (K). Según esto creo que es una de las mejores opciones que me encuentro en cuestion de iluminación LED para plantas, pero el problema en sí es el precio, además de que es totalmente necesario un disipador por el rango de operación del LED. De cualquier modo si lo llegas a hacer con un LED más sencillo sube fotos por favor ya que sería bueno ver que resultados tiene el invitro con ese tipo de iluminación. Saludos.

 

Muy interesante tú trabajo Monodesnudo, me gustaría ver tu sitio web. Bueno respecto a tus preguntas, lo del led, Chaac, quien es un especialista en cuestiones electrónicas, entre otras cosas, te ha dado la respuesta.

Con respecto a el fotoperiodo, éste se divide en 24 horas de tal forma que 24/7 lo entiendo como 24 horas de luz por 7 de oscuridad, no tiene sentido, yo lo dejaría en 18/6.

El frasco se puede sustituir sin mayor problema por un tubo de ensayo, la variable afectada será el tiempo que dure la planta in vitro y ésta depende de la cantidad de medio. La planta durará viva hasta que se agoten los nutrientes del medio, en un frasco con 50 mL de medio durará unos 6 meses y después se tendrá que transplantar.

En cuanto a los tiempos de germinación, en mi poca experiencia, la mayoría de las carnívoras y otras como cactaceas y orquídeas, germinan en 20 a 30 días. Espero haber respondido a tus preguntas.

 

hola Acourtia y Chaak,

Chaak, en lo que estoy pensando en en esto:

http://www.led1.de/shop/product_inf...ed-10mm-4chiphighpower-white-11-lumen-c-50_51

barato, bajo voltaje (puedo usar pilas botón para una expo sin cables, luego fuentes de alimentación), bajo consumo y no necesitan refrigeración como sí pasa con los power led. En alguna parte del foro encontré un post sobre el espectro lumínico adecuado para cultivo pero ahora no puedo encontrarlo. Básicamente mi pregunta es:
escojo el warm white, el white, el blue, el green (que es el que mas lumens produce), el yellow?
(el red directamente lo descarto, a no ser que me de por hacer "el cultivo del submarino")
Como dice Acourtia lo suyo es probar y probar. De hecho, creo que sería un bonito experimento. Poner unas semillas previamente germinadas in vitro en frascos cada uno con una luz de led diferente y ver que pasa. Supongo que esto se habrá hecho ya. Voy a buscar un poco y os cuento.
No sé si un solo led le daría toda la chicha fotónica que necesita una planta pero teniendo en cuenta que también está la luz ambiente que pasa por el cristal del frasco, quizá no vaya tan mal.

Acourtia, cuando me refería a 24/7 pretendía decir veinticuatro horas al día, siete días a la semana. Todo el rato, vamos.
Como muy bien sabes, en algunas plantas se puede variar el ciclo entre crecimiento y floración manipulando el fotoperiodo. Los mariguanos de interior, o a los que yo he leido (impresionantes, algunos foros de cannabis) , dan a sus plantas luz continua durante el periodo de crecimiento y luego pasan a 12/12 para florar. De hecho, creo que si a una de esas plantas en floración la vuelves a dar luz continua deja de hacer flores y vuelve a crecer. Lo hacen para esquejes, creo.
Por cierto, en el post 160 de este hilo hablas de un fotoperiodo de 18/8. es un error, no?

Sobre lo de los nutrientes del medio y lo de los 6 meses... hay que transplantar forzosamente? no podría re-fertilizarse con abono esterilizado?

mas preguntas
tienes constancia de si se produce algún tipo de "bonsaificación" en las plantas debido a la falta de espacio para las raices?
de hecho no he podido ver raíces en las fotos, pero si "callus", que no se si es una característica de las carnívoras o del cultivo in vitro...
por ejemplo, si pusiésemos una semilla de una planta grande como un girasol en un bote qué crees que pasaría? crecería hasta llegar a la tapa? sin raíces?
y el agua? no se ve limitada la capacidad de la planta para producir tejidos por la cantidad determinada de agua en el medio de su pequeño universo?

ahora otras sobre el aire,
así pues, la pequeña parte de atmósfera que encerramos dentro del frasco es la que la planta va usando durante toda su vida, no?
va cambiando el oxigeno por co2 y viceversa todo el rato?
fascinante

voy a ponerme a ello ya y como no he podido encontrar en las tiendas ni medio M/S ni sales para hidroponía (y no me apetece esperar paquetes de correo) me lo voy a fabricar con un abono especial para orquídeas que lleva micronutrientes y oligoelementos de algas. Esto último crees que pueda ser perjudicial? siento ser tan vago en mi descripción pero no tengo el bote conmigo. Luego pondré toda la composición tan detalladamente como pueda en otro post, por si tienes la gentileza de visarmela y darme algún consejo sobre proporciones.
Por cierto, glucosa o azucar? blanca o morena? sé que ya has respondido a esto antes pero no lo encuentro...

mil gracias a todos
en cuanto tenga algo que enseñar os lo envío
saludos

 

parece que lo de los leds se aclara:
http://www.led-grow-master.com/PlantVisionLED.html
al final no será tan mala idea el "cultivo del submarino"

 

Hola. Pues para abarcar el espectro luminoso sería cosa de buscar un LED o un grupo de LEDs que abarquen el espectro visible que va de 400 a 700 nm más allá de 400 son los UV; además sostengo que la intensidad luminosa es de lo más importante así que unos cuantos LED no lograrán tener un efecto notable. De cualquier modo, ya noscontarás por cuál optaste.

 

hola,

pues si, Chaak, creo que tienes razón y que unos simples leds no son suficientes. He estado viendo experimentos del tipo "leds contra fluorescentes" tanto para crecimiento de herbáceas como de árboles, en condiciones de laboratorio y de momento ganan los fluoros de goleada.
Aunque en el largo plazo son mas baratos los de leds, la inversion inicial es notable ya que estamos hablando de complejos arrays de leds balanceados para darle a la planta el tipo de luz que necesita, asi que hay de diferentes colores y tambien UV, invisibles al ojo humano, que con sus respectivos receptáculos y fuentes de alimentación se ponen en un buen montón de billetes. Ademas los leds UV no pueden estar muy cerca de las plantas porque las mata.

...así que supongo que de momento mis luces serán mas para poder ver bien lo que pase en el bote que verdaderas luces de crecimiento... pero eso solo necesitamos saberlo nosotros!

saludos

 

Hola Acourtia,

aqui esta la etiqueta del abono para orquideas con el que pretendo hacer mi medio, a ver que te parece:

http://www.compojardineria.es/f8.php?id=160

no se si con eso te haces una idea o si necesitas saber los microelementos y sus porcentajes

gracias y saludos

 

sobre lo de leds para crecimiento de plantas ...está todo aquí:

http://www.instructables.com/answers/What-type-of-LEDs-are-used-for-grow-LED-lights/

un montón de información actualizada, aunque con los leds pasa como con los ordenadores, que cada 18 meses multiplican por dos su capacidad, reduciendo el precio al mismo tiempo.

habrá que probar
saludos

 

bueno,

tras un largo fin de semana mirando aquí y allá creo que me he aclarado un poco yo mismo con respecto a algunas cuestiones:

-el in-vitro tiene dos modalidades principalmente: a partir de explantos y a partir de semillas.
a/ a partir de explantos
después de esterilizar se coloca una parte de la planta a reproducir (preferiblemente la punta de una rama, mejor la principal) en un medio específico, con nutrientes adecuados y con el ph controlado, en el cual se agregan unas drogas (factores de crecimiento y hormonas) para fomentar el desarrollo de raíces y partes aéreas. Al cabo de un tiempo sale el callus que es como un apelotonamiento descontrolado de células vegetales. Eventualmente, del callus salen raíces y entonces el el momento de transplantarlo a otro medio estéril, ya sin las drogas iniciales, en el cual las raíces proliferan y las partes aéreas empiezan a desarrollarse. La planta prospera en este medio y puede vivir así todo su ciclo o ser transplantada a tierra, tras lavar toda la sopa de agar de las raíces, aclimatándola lentamente al mundo exterior mediante una bolsa o método similar para ir reduciendo la humedad relativa poco a poco.

b/a partir de semillas
se esterilizan las semillas y se colocan sobre un medio universal o específico para el tipo de planta en concreto pero en cualquier caso sin drogas. Germinan y crecen como plantas normales (sin callus) hasta que agotan los recursos del medio o son transplantadas.

por favor, Acourtia, esto es así?
de todas formas me vendría muy bien que me contestases a las preguntas que te hacía en el otro post sobre la "bonsaificación", sobre el problema del agua y sobre el aire y su ciclo. He encontrado bastante info sobre "tisse culture" para propagación y germinación pero poco sobre crecimiento a largo plazo in vitro. Espero que con tu experiencia con las orquídeas puedas decirme algo al respecto.
Cuanto tiempo has llegado (o se ha llegado) a conservar in vitro una planta (cambiando el medio cuando fuera necesario)?

sobre la luz,
los leds solo emiten una frecuencia del espectro lumínico concreta mientras que el sol emite en un ancho de espectro muy grande, gran parte de él invisible para nosotros pero no para las plantas, así que lo que tenemos que reproducir artificialmente es un conjunto de frecuencias por lo que si usamos leds necesitamos de varios tipos, incluyendo diferentes cantidades de infrarrojos y de ultravioletas. Algunas de estas radiaciones son perjudiciales para las plantas si están demasiado cerca de la fuente emisora (el led), así que la operación es un tanto delicada. Algunos experimentos recientes muestran que las plantas crecen bajo este tipo de iluminación (arrays de muchos leds de diferentes tipos para hacer una luz a medida de las plantas) aunque los resultados son peores, atendiendo al vigor y aspecto de las plantas, que usando una mezcla de fluorescentes normales y de cultivo, en condiciones de laboratorio.

pronto fotos
un saludo

 

¡¡¡¡Que preguntas Monodesnudo, sobre varios temas y además algunas muy interesantes!!!!. He de reconocer que no había tenido dificultad en responder a las preguntas en este post. Bueno como son varias, voy a tratar de contestar una a una y si se me escapan algunas te sugiero la vuelvas a hacer.

Con respecto al espectro electromagnético, las plantas tienen clorofila, puede ser el tipo A o tipo B, es la responsable de la absorción de la radiación electromagnética. La A absorbe a 430 nm(corresponde a la luz azul del espectro visible) y a 660 nm(Luz de color rojo), la clorofila B también absorbe en las dos regiones del espectro visible, con base en lo anterior, la luz que reciban las plantas deberá tener esas longitudes de onda.

Ahora, como las plantas in vitro se hallan creciendo en un medio de cultivo con una porción de aire, el CO2 es absorbido por la planta y convertido a carbohidratos, mediante la conversión de la energía contenida en la radiación electromagnética que fue absorbida por la clorofila. Aquí quiero hacer una aclaración, in vitro la planta realiza la fotosíntesis en una cantidad menor que una planta creciendo en el suelo, su energía proviene, principalmente, de la degradación de los carbohidratos que contiene el medio de cultivo(sacarosa que no es más que azúcar morena o blanca), la planta utiliza el esqueleto de carbonos de la sacarosa para fabricar sus aminoácidos(haciendo uso de los compuestos con nitrógeno contenidos en el medio) y con ello sus proteínas para poder crecer.

Después de que la planta o plantas contenidas en el frasco, agotan los nutrientes(la sacarosa y los compuestos que contienen nitrógeno), aunado a la disminución de la cantidad de agua atrapada en el agar, dejan de crecer y entonces se requiere transplantar a medio de cultivo nuevo. El tiempo que permanece en el frasco es función de la especie, del número de plantas y de la cantidad de medio de cultivo. En orquídeas, he tenido plantas hasta por un año, sin tener que transplantar.

Con respecto al cultivo in vitro, se pueden obtener plantas por medio del cultivo de una parte de la planta(peciolo, hoja, tallo, meristemos etc) en un medio con reguladores del crecimiento(no son drogas), se puede formar un callo o no. Lo demás es como bien lo describes.

Por otro lado, gracias por la corrección del fotoperiodo, cometí un error no es 18/8, debe ser 18/6.

Ahora, si una planta va a ser cultivada en interiores, con iluminación, proporcionada por leds, focos etc, la radiación electromagnética que emitan, así como la intensidad, deberá cubrir la zona del azul y roja del espectro visible. Hay que tener en cuenta, que en estas condiciones, las plantas obtienen su energía principalmente de la fotosíntesis, no de los carbohidratos, absorben el CO2 de la atmósfera y liberan oxígeno.

Espero haber contestado todas tus preguntas.

 

grande Acourtia

sin duda, de las mejores cosas de internet es poder poner a un (bondadoso) experto en bioquímica como tú en contacto con un neófito como yo y como tantos que seguimos tu hilo.
Hablando de hilos, voy a hacer uno nuevo en el que poner mis experiencias. Precisamente ahora estoy preparando botes para 10 especies diferentes y haciendo fotos. Creo que ya se sale del contenido de este hilo tuyo porque yo voy a probar el in-vitro con un montón de plantas diferentes, y ninguna carnívora (de momento). Estoy tratando de averiguar sobre todo la viabilidad de unas y otras así como los tiempos de crecimiento.
Por cierto, que te parece el abono que estoy utilizando para mi sopa de agar?

Entonces, a ver si te he entendido: in vitro, la función fotosintética es menos intensa y la energía proviene mas de los azucares y el nitrógeno del medio. Pero aun así, la planta consume co2. La pregunta es: cuando la planta agota el co2, qué pasa?
Por otro lado, la fotosíntesis, poca o mucha, produce oxigeno, no?
se tendrá que equilibrar lo uno con lo otro, supongo... te lo pregunto porque tengo la duda con respecto a algunos cultivadores in vitro que dejan un agujero (tapado con un filtro para que no entren esporas ni bacterias) pero que permite un cierto intercambio de atmósfera...

solo dos mas:
--alguna experiencia sobre re-abonado in vitro (esterilizando el abono, claro)?

--tienes conocimiento de alguna experiencia poniendo electricidad (ánodo +cátodo, como en un circuito de electrolisis, o en una cámara Kirlian) en el medio de cultivo?

maestro, cuando decía drogas no me refería a narcóticos:
droga.
(Del ár. hisp. *ḥaṭrúka; literalmente, 'charlatanería').
1. f. Sustancia mineral, vegetal o animal, que se emplea en la medicina, en la industria o en las bellas artes.
...me refería genéricamente a compuestos (factores de crecimiento, hormonas...) que van mas allá de las complejidades en las que estoy dispuesto a meterme , al menos de momento.

gracias de nuevo por alumbrarme y en cuanto tenga el hilo colgado te invito.

un saludo

 

El CO2 del frasco no lo agota, lo esta reciclando(la fotosíntesis consume co2 y la degradación de carbohidratos libera co2) y sí esta produciendo O2 con la poca actividad fotosintética. Digamos, in vitro la planta sobrevive gracias al azúcar. Ahora, cuando la tapa del frasco permite el intercambio de gases, su función es permitir a la planta desarrollar una cutícula más gruesa, para no deshidratarse cuando se pase a tierra y hacer que la planta dependa más de la fotosíntesis que del azúcar del medio.

Sobre el fertilizante, todos traen tres números, separados por guiones, se refieren al % de P, N y K. Yo hago énfasis en los compuestos que aportan el N. Sí la mayor cantidad del % N es en forma de urea, no es de gran utilidad en cultivo in vitro por que no es absorbida por las raíces de la planta, es deseable que el fertilizante tenga una mayor cantidad de nitratos que si son absorbidos por las raíces y su N se incorpora a las proteínas. En resumen, revisa la composición del fertilizante y ten en cuenta el efecto osmótico, si la concentración del fertilizante es alta, la planta morirá deshidratada, es mejor diluido.

respecto a las dos últimas preguntas, no conozco nada sobre ello.

Y me surge una duda ¿Cuál es la finalidad de "poner electricidad (ánodo +cátodo, como en un circuito de electrolisis, o en una cámara Kirlian) en el medio de cultivo?"