Cultivo in vitro

hola quisiera saber si alguien es tan amable de poder ayudarme llevo un año en el asunto del cultivo in vitro de orquideas y pues no he tenido buenos resultados todo el procedimiento lo llevo a cabo bien pero aun asi los frascos despues de la siembra se contaminan y pues m dijeron q podria ser x la temperatura si alguie puede ayudarme se lo agradeceria

 

Hola malfurion,
bienvenido al foro.

Si miras, justo por encima de donde aparece tu post, hay un "post it": Cultivo in vitro I y II. Alli vas a encontrar en la primera página todo y mucho más de lo que hay que saber para un in vitro casero. Compara los procedimientos con lo que has hecho tu y quizás des asi con el fallo.

Si las contaminaciones son después de la siembra, sólo caben las siguientes posibilidades:
- las semillas estaban contaminadas ---> esterilizar las semillas
- los frascos se contaminaron al manipularlos ---> mantener la higiene durante la siembra, esterilizar todos los útiles, mantener el ambiente esteril
- los frascos se contaminan a travez del orificio en la tapa ---> cambiar el sistema de filtro/tapa que estés usando.

La "temperatura" ella sola no puede contaminar; grandes cambios de temperatura pueden hacer que la ventilación de la tapa se humedezca y asi se vuelva trasportadore de gérmenes. Procura que siempre esté seco el material que uses.

Saludos
Arturo

 

Malfurion, nada puedo decir que no te haya dicho ya Arturo... Un saludo

 

bueno la primera opción de las semillas contaminadas ya la descarte porq yo utilizo capsulas cerradas maduras pero totalmente selladas y io esterilizo la capsula primero con lejía luego con alcohol y x ultimo la lavo cn agua destilada estéril y apenas termino de enjuagar corto y siembro
y la segunda opción debo verla ya q los frascos los pulverizo con alcohol antes y después de meterlos en la cámara y los instrumentos están cubiertos x aluminio y fueron previamente esterilizados en la olla y luego antes de abrir el papel pulverizo con alcohol
mmmmm io he seguido el blog de monstera y he seguido todas las instrucciones podría ser q la cámara de siembra influya x estar construida cn madera cubierta de barniz ???

 

Prueba a meter un pequeño recipiente con lejía en la caja, los vapores te ayudarán, puedes rociar un poco la caja por dentro con la lejía también, deja reposar todo unos minutos antes de usar. Podría ser la madera, pero he visto hacerlo en peores condiciones...

ábrela tal cual la saques de la leía, pasa del alcohol y el agua destilada, menos pasos, menos posibilidades de contaminación, yo no las aclaro (las cápsulas) muchas veces.
Ya nos contarás,

Olivia

 

gracias x todo lo pondré en practica pero cuando estuve estudiando sobre los cultivos in vitro ninguna fuente muestra el procedimiento de siembra EN LA CAMARA con detalles lo único q mencionaban era q había q pulverizar alcohol para esterilizar asiq si podrían darme algún procedimiento diferente o los mas usados para introducir los frascos y instrumentos a la caja y algo mas detallado se los agradecería

 

Yo lo meto todo dentro rocio con lejía y lo dejo reposar al menos 5 - 10 minutos, ten los frascos abiertos el mínimo tiempo posible y no pases mucho los guantes por encima.

En mi caso la lejía lo mata todo y no hace falta poner muchísima, al principio ponía tanta que al abrir la caja me tiraba para atrás, ahora un par de tiradas de esprai en la esquina y listo.

Si esperas mucho tiempo los utensilios se oxidan...

 

aja creo q ya encontre una constante tu utilizas lejia mientras q yo rocio con alcohol podria ser eso ????

 

bueno ya encontré el método correcto de siembra el anterior estaba mal y bueno stoy comenzando con algo innovador un cruce de brassavola nodosa x spathoglottis plicata y soy estudiante de biología y lo q m sorprende es la facilidad en q diferentes variedades de orquídeas se cruzan y me anime a acer esa rara polinizacion q quede sorprendido al ver q las semillas siguieron adelante espero ver que saldra de este experimento, el próximo mes sembrare varias capsulas de peristeria elata y podrian decirme q medio de cultivo es mas eficasz para terrestres ????

 

hola, la verdad de esto no se nada y estoy por comenzar a hacer unas pruebas, mas que ayudarlos lo que tengo son muchas preguntas, ya que de lo que he leido por ahi hay unos detalles que no menciona nadie, por ejemplo, que cantidad de semillas se debe colocar en el frasco, cuanto tiempo despues de sembrar se debe hacer el primer repique, cuantos repiques se deben hacer, como se esparce la semilla dentro del frasco etc, si alguien sabe esto le agradeceria su respuesta

 

bueno contestare cada una de tus preguntas segun lo q he estudiado mira si agregas muxas semillas a los frascos tendras problemas xq el medio se consumira y tendras q repicar demaciado pronto xq sino los protocormos competiran x el medio lo mejor seria una cantidad q no sea exsesiva q no sea cm una alfronbra de semillas cubriendo el cultivo mejor solo una cantidad pekeña y asi el repikdo sera cuando las plantas ya en verdd esten con hojas y todo y lo del tiempo para el primer repike pss eso depende de la velocidad de crecimiento de kda orquidea y tambnsi tu vez q el medio perdio sus propiedades o las plantas estan compitiendo muxo x el espacio y segun tengo entendido se ace solo un solo repikdo

 

a si lo olvidaba io tambnsoy nuevo pero ya llevo un año en esto asiq si alguien ve q mis respuestas estan equivokdas pss les agradecería q m ayudaran en estas preguntas y m corrijan

 

Hola,
antes de responder queria preguntarles si no sería mejor seguir este post en el hilo de "in vitro i y II" ? Asi no se dispersa tanto la información en distintos sitios y además asi todos mostramos nuestro agradecimiento a todos - ¡y sobre todo a una! - l@s que ya han expuesto alli toda su experiencia práctica.

Bueno,
las capsulas de las orquideas crecen igual que frutos en un árbol, de hecho son lo mismo. E igual que otros frutos, pueden crecer independientemente de formar semillas o no incluso indepedientemente de haber sido polinizadas o no, y incluso después de haber sido polinizados con polen de plantas muy diversas. AL madurar el fruto eso no significa que contenga semillas viables. Todos hemos visto manzanas sin pipas (el manzano sí requiere polinización), todos conocemos mangas sin hueso (mejor: sin embrión en el hueso).

En el grupo al que pertenecen los Zygopetalum se da el caso, que parece que qualquier "cruce" es factible - y hay semillas viables y las plantas germinan y - resultan ser igual a la madre. No ha habido cruce!

Las semillas suelen estar completas y viables después de 3/4 del tiempo de maduración de la cápsula. Hay que buscar cual es este tiempo para cada especie para calcular bien el tiempo. Tambien hay que pensar que el fruto tardará más en madurar en invierno, en interiores, bajo condiciones adversas...

Para ver si realmente hay embriones viables en las semillas, habría que verlas bajo microscópio.

Dado el tamaño de las semillas, fuera de un laboratorio es punto menos que imposible contarlas al meterlas en el frasco. Hay quien mete muchas - tres frascos madre por ejemplo - y repica rápido; yo prefiero llenar unos 20 frascos más o menos, asi tengo más tiempo por si en alguno realmente hay muchos protocormos. No es tan dificil la siembra una vez que le has cogido el truco al protocolo de la higiene... lo realmente dificil es el cuidado de los protocormos luego....son muchos años de cuidados intensivos hasta la primera flor! Sembrar es un hora....

Saludos
Arturo

 

muchas gracias por sus respuestas, la verdad lo de la siembra inicial ya lo entendi, osea debo sembrar la mayor de frascos madres posibles para no tener problemas con que se consuman muy rapido el medio de cultivo y tenga yo que hacer un repicado tan rapido y asi el repicado sea cuando las plantulas esten lo mas grandes posibles, ahora se crean otras dudas, leyendo lo del deflasking se que debo limpiar bien las plantulas y separar las raices y antes aclimatarlas a su sitio definitivo, entonces con el repicado debo hacer lo mismo de lavar y separar las raices para ponerlas en un nuevo frasco? o solamente cortar el medio de cultivo con plantines o protocormo del frasco madre e introducirlo en el nuevo frasco y ellas despues se esparcen solas?, otra cosa voy a hacer pruebas con el metodo de camara esteril de jesus choy, ustedes han probado hacerlo con camara esteril?

saludos y disculpen el abuso

 

Hola Roberto,

perdona si mi respuesta es un poco tajante.... Por propia experiencia te digo: Primero llena los frascos. Luego espera una semana para descartar los que estén contaminados. Luego siembra.
Y nada más.
Si no se han contaminado....
si realmente germinan y forman protocormos viables....

solo entonces... puedes empezar a pensar en el repique! Quedará tiempo de más para empezar con los siguientes pasos. Calcula unos tres meses...!!
Suerte en la siembra!
Saludos
Arturo