In vitro a modo de prueba

Re: in vitro a modo de prueba

hola a todos
estoy escribiendo desde un cibert , porque hasta el sabado , parece no tengo internet, cuando ya pueda escribir desde casa continuare , con nuestra experencia , mas fotografias
gracias por la paciencia

 

Re: in vitro a modo de prueba

hola a todos

para bajar las emociones les puse una foto de las secuencias de nuestros frascos, de las formaciones de protocornos , es la mejor manera de saber , cuando germinan nuestras orquideas.


texto
la foto es prestada

 

Re: in vitro a modo de prueba

ESTA MUY BUENO SILVIA....GRACIAS POR COMPARTIR TU EXPERIENCIA

 

Re: in vitro a modo de prueba

Esterilización de las semillas. L

las semillas solamente pueden ser esterilizadas con productos químicos, pues otro recurso las mataría. El más fácil de conseguir, y que todos tienen en casa, es el cloro.

Normalmente el cloro está preparado a la concentración del 2.2%, esta indicación debe estar en el rótulo y debe ser observada atentamente.
Para desinfectar las semillas se prepara una solución con agua destilada y cloro, que al final tendrá concentración entre 6% a 10%. Para hacerla, mezclamos 1 ml de cloro y 10 ml de agua destilada, lo que nos da una concentración aproximada de 7.5%.

Con la solución preparada se toma un pequeño frasco con tapa (frasco de penicilina inyectable, un tubo de ensayo pequeño o otro con capacidad de 5 ml) y se coloca una pequeña cantidad de semillas en su interior, las semillas restantes se guardan de nuevo en frío. Volcar unos 2 ml del cloro preparado sobre las semillas, tapar y agitar por 8 minutos aproximadamente.

Se deja descansar el frasco por 1 minuto en posición vertical. Durante este reposo se observará en el frasco que una parte de las semillas se deposita en el fondo y una otra parte queda flotando; estas semillas que flotan son semillas infértiles y deben ser eliminadas.

Pasado el minuto de descanso, se retira lo más que se pueda del cloro y las semillas flotantes, esto se puede hacer con el auxilio de una jeringa sin aguja (la aguja se tapa con las semillas), cuidando de no mover demasiado el frasco para evitar que las semillas del fondo se levanten.


se acuerdan que yo les dije que se debia poner con los frascos , agua destilada en la olla para eslerilizar ??? , bueno este agua ya esterilizada se usa en el ultimo paso , del lavado de las semillas, para garantir, toda la asepsia posible

Silvia

 

Re: in vitro a modo de prueba

Cámaras estériles

esta no es la forma con la cual nosotras nos manejamos , usamos el metodo de la jeringuilla que se los comento a continuacion, de este mensaje


Las medidas para ambas son las mismas pero notaremos que una de ellas tiene la parte correspondiente al visor, inclinada; esto se hace para permitir una mejor visualización sobre lo que se va a trabajar. En ambos casos el ambiente interno debe ser estéril y ambas cámaras son estáticas (no tienen flujo laminar). Las medidas de las cámaras estériles estáticas son prácticamente las mismas o muy parecidas.

Al no disponer de ventilación interna (flujo laminar) hay una mayor probabilidad de contaminación en el interior de la cámara, de esta manera y después de muchos estudios, se determinó el tamaño ideal de la cámara.
Para mantener el ambiente interno estéril, es aconsejable dejar adentro de la cámara un pequeño pote con solución de esterilización al 15%. Su función será la de evaporar gradualmente la solución y saturar el interior con gases de cloro. Esto asegura que ningún microbio, hongo u otra bacteria pueda sobrevivir.

Antes de utilizar la cámara por primera vez, se debe pulverizar el interior con una solución de cloro al 15% durante 15 días antes de usarla. Es lo aconsejable para evitar perder los primeros frascos que se trabajen. Nada impide utilizarla apenas se construya, pero los riesgos de contaminación aumentan al 80% de probabilidad.

 

Re: in vitro a modo de prueba

METODO DE LA JERINGUILLA

1. Tome una jeringuilla de 5 ml, tape la punta de la jeringuilla con un trozo de algodón envuelto en un pedazo de tela de media nylon (vea el diagrama), inserte el émbolo nuevamente y autoclave. Al mismo tiempo, autoclave una cierta cantidad de agua destilada (en frascos o botellas) y las pinzas.

2. Saque el émbolo de la jeringuilla y vierta una pequeña cantidad de semillas en la jeringa. (Una gran cantidad de semillas formará una masa en forma de pasta si se usa la técnica 5b para la siembra, haciendo difícil la siembra apropiada). Inserte de nuevo el émbolo.

3. Absorber con la jeringuilla 4 ml de la solución de cloro al 1% (a la que se le añadió una gota de detergente). Agite la jeringa por 5 minutos (u otro tiempo de esterilización), asegúrese de que las semillas se mojen completamente en la solución y que no queden atrapadas en burbujas de aire. Expulse esta solución y absorba de nuevo otra porción de solución fresca. Agite por otros 5 minutos y vuelva a expulsarla.

4. Lave las semillas 3-4 veces absorbiendo agua destilada y esterilizada en la jeringuilla, agitando por un momento y luego expulsando el líquido.

5. Siembre las semillas ya sea a) esterilizando el cuello de la jeringuilla, vertiendo las semillas dentro del agujero dentro de la tapa del frasco , ovbiamente cerrado , expulsando todo el exceso de agua, , volvimas a pasar alcohol por las tapas, hicimos un tapon de algodon, con el tapon puesto , volvimos a pasa alcohol nuevamente por toda la tapa, y las cerramos con un papel film, que cada tanto cambiamos por otro , teniendo la precaucion de desinfectar con alchol, la tapa.
Silvia

 

Re: in vitro a modo de prueba

la espera

los frascos ya germinado se ponen en uuna habitacion , casi a luz plena, pero no al sol manteniendo una constante de temperatura, entre 25 y 35º , cuidando tambien , que tuviera 16 hrs, de luz
y entonces se comienza de un tiempo a ver señales como estas
son las fotos de lo protocorno que antes les envie




Silvia

 

Re: in vitro a modo de prueba

Este es el resultado de la espera.











continuo repitiendo la foto es prestada , esta es la unica que no es de nuestra coleccion

 

Re: in vitro a modo de prueba



me alientas a hacerlo ....

 

Re: in vitro a modo de prueba

Si Marylis

cuando yo lo hice con mi amiga, pasamos unos nervios barbaros !!!, pero luego, cuando ves en los frascos salir esas cabezitas de alfileres que son los protocornos , no importa el tiempo empeñado en ello , no importa, si algun frasco tiene hongos , no importa el tiempo que debes esperar para verlas florecer , solamente importa esa sensacion que te embarga

LO HE LOGRADO !!!

mañana pondre mas fotos y luego me diras !!!! que piensas
trate de escribirlo muy simple , precisamente para lograr esto , que sientan ganas de intentarlo !!!

por eso si algo no comprendes , si tienes dudas o no se, preguntame lo que quieras , desde mi experencia , siempre te respondere
recibe mis recuerdos Silvia

 

Re: in vitro a modo de prueba

silvia me parece muy buen el aporte.....podrias hacer un documento sobre tu experiencia y publicarlo????.........felicitaciones

 

Re: in vitro a modo de prueba

Francisco


lo que me decis no lo entiendo, se mas claro porfi
saludos
silvia

 

Re: in vitro a modo de prueba

Silvia, osea que hagas un pdf con toda tu informacion

 

Re: in vitro a modo de prueba

me mataste Francisco

dejame demostrar mi ignorancia , que es un pdf ???
como veras no manejo todos los temas !!!!

Silvia

 

----- EDITADO PORQUE YA ME COMPRENDIO SILVIA -----