Siembra y germinación de orquídeas in-vitro

Recomiendo este link: http://www.orchideenvermehrung.at/english/index.htm

En cuanto al uso de la vitamina B1 en altas dosis para 'estimular el crecimiento radicular', no hay mas que mirar en las páginas científicas de internet para ver que no sirve y que es contraproducente. Si quieres usar fitohormonas naturales, puedes usar agua de sauce. El ácido indolbutyrico (IBA) y el ácildo salicylico (SA) son los principios activos. Funciona en plantas adultas (nunca he hecho cortes de yemas de varas de Phal) y es fácil de hacer. Mira en internet bajo 'agua de sauce' o 'willow water'. Y si prefieres tabletas, pues con una 'aspirina' tienes ...

suerte.

 

Hoy he separado el keiki y he cogido los trozos de vara con yema para probar, siguiendo todos los pasos y desinfectando todo. A ver que tal va el experimento, ya os contaré en unas semanas.
(en los tarros se les ha quedado algo del medio pegado en las paredes pero al calentarlos en baño maría me preocupe de que todo el tarro estuviera cubierto de agua, es la primera vez así que ha sido todo un caos)

 

Suerte Selene. Hoy también estoy cocinando...

He editado la primera entrada con un trabajo de Muñoz y Jimenez publicado en la revista Lankesteriana sobre germinación de Phragmipedium.

 

Hola a todos

Repasando cada paso y resolviendo mis dudas para hacer el "in vitro" he encontrado un Manual en Pdf muy interesante sobre una investigacion: Manual para el Cultivo in vitro de la Orquidea Catleya Nobilior
Aca lo comparto

http://www.festivaldelaorquidea.com/docs/ManualOrquideas2011.pdf

Es como un resúmen de todo lo que tenemos en el foro, bastante didáctico

 

Vaya, muy completo y bien estructurado. Para que no se pierda paso el link también al primer post. Gracias por subirlo, Maria del Valle!
Los que hayan hecho in-vitro sabrán el problema del paso 10 (siembra después de esterilizar en sobre de papel); es casi imposible... segun el papel. Mucho mas fácil en comparación el método de la jeringa o alternativamente la desinfección por vapores de lejía.
Y en los medios caseros: para medir el pH hay que esperar a que se enfríe para que de los valores reales; es simplemente apartar una pequeña parte, dejarla enfriar sin que se solidifique, medir y en su caso ajustar el pH y medir (otra pequeña parte que se enfría rápido) y comprobar...

Por cierto: acabo de hacer otros 1,3l de medio y solo he usado 4g de agar-agar (Vahiné/Mercadona) Obviamente es muy puro y con menor cantidad se consigue el mismo espesor deseado.
Tiamína: He vuelto a releer todos los trabajos científicos que he encontrado disponibles y :
- es impescindible para medios de cultivo de tejidos vegetales, medios líquidos.
- en medios no líquidos para siembra y propagación por yemas parece no influir en la formación/crecimiento de las raíces. Yo a mis medios como máximo añado una tableta (300mg) por 1-1,3 l.
- en riego foliar parece inducir en la planta 'algo' llamado 'resistencia adquirida', lo cual es un fortalecimiento de la planta frente a factores adversos externos.

 

De nada Arturo, yo estoy mas que agradecida a este foro por la informacion, y sobre todo a mikquel, Jose Maria Olivia y a ti por revisar y organizar la info, y a los mensajes que he recibido y a la buena onda de todos!!! Ahora me resta comenzar y terminar de informarme!!!

Por ejemplo: por favor, alguien me puede decir si las Cymbidium son Orquis de hábitos terrestres o epifitas?
Lo digo por el medio que debo preparar...
Desde ya mil gracias!!

 

Yo le pregunte a olivia eb su momento sobre el tema de las cym y me dijo que a pesar de ser terrestres en su mayoria, tambien se desarrollam bien en el medio de platabo y tomate

 

Pues yo lo he enviado un par de email hace mas de tres meses y no me ha contestado

 

Bien gracias Paula!!
Seria de probar en dos frascos...uno con medio para terrestres y otro para epifitas, digo yo...

 

Hola, alguien tiene idea de donde o como encontrar ya no el agar agar, sino la solución soluble en polvo, el medio knudson C con todos los compuestos.

Por si no fueran pocos los problemas con la asepsia, parece imposible de encontrar.

He estado viendo que usáis agar agar para alimentación, que pese a que sigue siendo lo mismo me imagino que los problemas de contaminación, hongos, bacterias, nematodos etc. se multiplicaran ¿no?

Luego está la gran estafa de los precios pvp que hacen que algo como matraces, placas de petri, agitadores de cristal que valen por poner un ejemplo 3 y ya tienen margen de ganancia te los vendan por 20.
Hace años compré varias veces como autónomo material de laboratorio y es muy muy muy pero que muy barato y resulta que hoy miro los precios y son en el mejor de los casos 3 veces más.

Estoy que saco chispas. Parece que nos han tomado por lelos, cada día más!

Y me gustaría experimentar con los procedimientos invitro tanto de siembra como de clonación.

Gracias!!!

 

No he leído todo el hilo, lo siento ahora iré poco a poco.

Yo no he practicado de momento pero por lo que voy aprendiendo puedo decirte

Es malo que la solución nutritiva quede por las paredes pues hace camino para los 'patógenos'.

Tiene que haber cierta respiración un pequeño orificio que no esté en contacto con el medio, cubierto por una tirita estéril y después cubierto con papel de plata.

En tubos cubiertos de algodón mejor y el algodón con algo de desinfectante, creo que agua oxigenada no estoy seguro.

 

Si el,edio queda bien esterilizado, no importa que quede por las paredes, lo unico es que dificulta la vision.
Los frascos tal y como los dices, son los ventilados, pero tambien se pueden usar de cierre hermetico (que son los que yo uso) y con estos el riesgo de contaminacion es menor, pero como en todo, cada uno tiene sus ventajas e inconvenientes, de momento con el cierre completo no he tenido problema y mis protocormos van estupendos.

 

De preguntas que estoy leyendo....

Dependiendo de la especie es mejor unas partes de la planta u otras, en unas es mejor trozos de hojas en otras raíces en otras partes de tallo etc.

Y supongo que el estado vegetativo en el que se encuentre la planta será clave también.

Es muy fácil, solo experimentando, cogéis una placa de petri y un trozo de raíz un trozo de hoja y uno de tallo... o en placas botes o lo que sea separados, y veis que explantes tiran, no tiran etc.

Veo que en las condiciones que hacéis los invitros la probabilidad de hongos, bacterias etc. es muy alta, ni siquiera campana.

No estaría de más el uso de algún antibiótico en la solución.

Es bueno tener un mechero cerca para ir pasando por la llama lo que se usa que preferiblemente ha de ser de vidrio o acero inoxidable.

Es muy importante mantener las temperaturas idóneas, no solo por la condensación que es un gran problema sino por mantener las condiciones óptimas durante todo el proceso.

El proceso metabólico de las plantas genera etileno, es por esto que siempre tiene que existir respiración.

 

Muy interesante!! Gracias, yo me había quedado con la historia del etileno, pero ya veo que también se puede hacer con frascos cerrados.

 

Kirikiri,

el agar-agar lo consigues en muchas tiendas en españa; en farmacias, en herbolarios y en tiendas ecológicas y, ultimamente, en grandes superficies como el mercadoxxxx. Cualquier agar seco - tanto en varas, como en polvo etc. - es inerte. ¿porqué iba a ser de otra manera?

No hay que mezclar cultivo de tejidos con cultivo de meristemas con siembra de semillas o esporas! Si bien hay parecidos, mejor no confundir al personal con distintas técnicas para diferentes formas de propagación. La gran desventaja de usar tejidos vegetales es que, si la planta de la cual proviene el tejido tiene alguna enfermedad, los tejidos están infectados. En semillas esto no se da. La gran ventaja es, en las especies que lo permiten, que es mucho mas rápido conseguir plantas bajo condiciones de laboratorio e invernadero.

Yo no trabajo con cámara estéril- ni siquiera uso el famoso glove-box - con simplemente trabajar rápido, con un estricto protocolo de higiene, de 15 frascos que suelo hacer a la vez, apenas uno o dos los pierdo por hongos. Si es siembra en verde, no suelo perder ningún frasco mas, si es siembra en seco (con vapores de lejía los ultimos) dos o tres frascos mas. Para mis 'necesidades' eso es mas que suficiente. El problema es que la semilla sea viable, primero y luego el arduo y lento (¡años!) proceso de repicar, 'deflaskar' (perdón!) y mimar a los alevines....

Yo uso frascos de mermelada/mostaza/embutidos limpios y con un pequeño agujero en la tapa. Justo después de sacarlos de la olla a presión les pongo una toallita desmaquilladora de algodón y la pego con cinta celo y ya.