Siembra y germinación de orquídeas in-vitro

Muchas gracias. No las voy a germinar con el hongo, sino con el "medio casero".
De todas formas me has aclarado la duda.
Gracias de nuevo!

 

Buenas noches. Llevo mucho tiempo leyendo este fantástico foro, especialmente el apartado de orquídeas, y finalmente me he decidido a registrarme y aportar, en la medida de lo posible.

Una única cuestión, por ahora. Se habla de esterilizar con peróxido de hidrógeno e hipoclorito sódico fundamentalmente. Aunque también están los amonios cuaternarios (Physan 20 y similares), ¿A nadie se le ha ocurrido utilizar ozono para este menester?. Tengo pensado utilizarlo, pero me gustaría saber si alguien tiene experiencia previa con este súper oxidante, o si tiene alguna incompatibilidad con los procesos in vitro, precisamente por esa capacidad oxidante. Sirve tanto para esterilizar el agua como el aire (sobre todo en un glove-box, o eso pienso yo).

Excelente hilo, se agradece el trabajo de @arturo uno y todos los participantes.

Reciban un cordial saludo.

 

Bienvenido al foro.
La verdad es que los términos 'esterilizar' y otros como los usamos aqui en el foro son erroneos y poco exactos.

En el fondo son dos procesos en el sembrado casero del in-vitro. Primero la pasteurización de los frascos con el medio. Partiendo que todo los componentes - frascos, tapas, etc . - antes de usarlos estaban 'limpios' y no contaminados con cepas especialmente activas, eso es más que suficiente. En la última tanda que he hecho, no tuve ninguna baja.
Luego está la descontaminación de superficies de las cápsulas y / o de las simientes. Para ello se puede usar el H2O2, el alcohol y la lejía diluida. O cualquier otro desinfectante de superficies. Di ninguna manera estos desinfectantes deben actuar con mas 'profundidad' - nunca mejor dicho - porque 'desinfectarían' el embrión matándolo. Por eso los tiempos que hay que guardar - y no pasar - para no dañar al germen. Los utensilios que vayamos a necesitar se pasteurizan al tiempo que los frascos y las superficies de trabajo, las manos etc. se limpian con alcohol, o con lejía diluida o cualquier otro desinfectante suave - jabón.
Para un glove box es mas que suficiente tenerlo limpio. Al faltar corrientes de aire y cuidando una rutina higiénica al manejar la cápsula y los frascos (ej.: nunca pasar con la mano por encima de un frasco abierto) tener contaminaciones es mas que improbable.
Sé que hay utensilios de descontaminación de aguas de acuarios a base de ozono (y rayos UV). Pero para el uso casero es peligroso si no se tienen conocimientos y experiencia. Jamás se me ocurriría ponerlo aquí en el foro, donde la gente es capaz de cerrar la rosca de los frascos antes de meterlos en la olla a presión y cosas semejantes... - si me pongo a pensar que alguien mezcle lejía con ... no duermo.

Yo me hice un glove box, y ya no lo utilizo. Trabajo mas rapido y mas certeramente y con la misma baja tasa de contaminación que con el. Que el aire está lleno de germenes es cierto, pero tambien es cierto que si tu haces diez placas petri y las dejas al aire cinco minutos sin taparlas, tampoco tendrás contaminación en todas - perderás ocho de las diez. Con una pasterización bien hecha, unos utensilios estériles, la boca tapada y las manos limpias ya tienes. No hace falta complicarlo mas.

Por cierto, yo no he hecho mas que recopilar la información que estaba en el foro anterior, para que también estuviera 'a mano' en este foro. No soy el autor de tanto conocimiento, pero gracias igualmente.

 

Buenas noches de nuevo. ¡Gracias por tu pronta respuesta @arturo uno!

Muchas gracias por la explicación. Evidentemente me refería a la descontaminación de superficies. Está claro que mis dudas y mi "obsesión" con la asepsia y la esterilización (aunque no sea correcto hablar de estos procesos sensu stricto, como bien dices) se deben a un exceso de teoría y un defecto de ponerla en práctica. Me gusta tener todo atado y aprendido antes de dar pasos. No obstante, el ozono no es en absoluto un gas peligroso. Antes de resultar nocivo, con una dosis mucho menor, ya es perceptible por nuestro sentido del olfato. La idea que tenía, era usarlo para disminuir al máximo el recuento de gérmenes en el agua (de nuevo no usaré el término esterilizar) y, en el caso de hacer una glove-box, mantener su interior lo más aséptico posible. La pasteurización (la conozco, tengo estudios dentro de la rama de Ciencias de la Salud, y Pasteur es casi de la familia ) con la olla a presión, sin duda. A falta de autoclave, buenas son ollas. Te puedo asegurar que son más peligrosos los vapores de la lejía que el propio ozono. Puedes estar tranquilo en ese aspecto. Sobre lo de los botes cerrados, qué decir, me parece chocante, aunque hay de todo.

Lo que haré será intentar mis propios experimentos comparativos y, si sale algo decente, compartirlo gustosamente, dado que al final lo que todos buscamos es una tasa de éxito lo más alta posible. Con tan solo variar la Tª y la HR, especialmente cuando son tal altas como en donde vivo, lo que a ti te puede funcionar perfecto, para mí puede ser un completo fracaso.

Sé que has recopilado información que no es de tu autoría. Conocía el foro antiguo, los excelentes aportes de @monstera y @Turrusta, así como parte de la bibliografía que has recopilado, pero el esfuerzo merece un agradecimiento igualmente, para mantener el tema in-vitro vivo.

¡Saludos cordiales!

 

Pero el agua ... el agua lo usas para hacer el medio, que primero hierves y luego pasteurizas. Usando agua destilada no veo que haya que bajar el recuento de gérmenes... y el agua que usas para 'lavar' la semillas en la jeringa (si usas ese método) también lo sacas estéril o de la farmacia o de un frasco solo con agua de la misma olla.
No estamos trabajando con cuerpos enfermos o con patógenos altamente contaminantes ... no es tanto: simplemente intentamos reducir la probabilidad de contaminación espontánea no deseada en un medio de cultivo. Mas problemático - ya veras cuando lo hagas - es que la semilla sea viable! Y luego, cuando pase del estado de protocormos, la endiablada paciencia que tienes que tener para mantener vivos unos diminutos seres durante varios años hasta que se valen por si mismos, bueno, mas o menos... un descuido y ¡adiosmuybuenas!
Por cierto, vivo en Gran Canaria, así que compartimos gérmenes.

 

Buenos días. Tienes razón. Igual me estoy complicando en demasía. Lo cierto es que te leo, y me dan más ganas de ponerme manos a la obra. Por lo pronto, ya tengo unas flores de cambria autopolinizadas y en cada nueva floración de mi pequeña y creciente colección, intentaré seguir polinizando. ¡Estoy con esto como un niño chico con un juguete nuevo! Empezaré por probar con semillas pequeñas, que no sean necesariamente de orquídeas.

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Yo soy de Tenerife. Ni la excusa del clima me dejas macho, . Por lo que veo, y me alegra, hay un montón de residentes en las islas que compartimos pasión por las orquídeas. Fíjate que empecé con esto en el mes de noviembre del año pasado, con una Phal agonizante que me "encasquetaron" para salvar y ya voy por las 20, la mayoría "descartes" de viveros, ¡y las que quedan!

Por lo pronto soy todo un protocormo, lleno de ilusión, eso sí. Seguiré en modo "lector", para no enguarrar mucho el hilo, hasta que tenga algo que aportar.

Saludos cordiales.

 

Siempre nos quedará la 'insularidad' ...

 

Me han entrado dudas de como esterilizar la glowe box con lejia /agua oxigenada .alguien sabe las cantidades?
Esque con el alcohol se me mueren todas

 

Se que no es lo mismo la semilla de orquídea que de carnivora pero de momento solo pude conseguir semillas de Drosera capensis, la pregunta es:

Si sanitizo las semillas con alcohol puedo afectar las grasas que la recubren, que concentración sería lo ideal para el etanol?

Tengo a la mano glutaraldehído y cloruro de benzalconio, alguien los ha utilizado?

Ya se que lo más económico y para no meterme en tanto rollo es utilizar hipoclorito pero quisiera saber si alguien ha tenido alguna experiencia con éstos desinfectantes, gracias por sus comentarios

 

Hola Jose, Ya te dije que no uso Glowe box. La camara de flujo, la desinfecto con lejia al 30%.

 

Hola Valpit.
El alcohol o etanol no son apropiados para desinfectar las semillas.
Tampoco he probado con los otros productos que citas.

 

Pues por donde he estado buscando parece que no se usan tampoco, seguramente afectan la germinación

 

Una Placa petri de Paphios sembrados en Junio. Eran pocas semillas, però solo una germino...
Tiene dos hojitas y a pesar de todo esta precioso...

 

Gracias mickel

 

Que suerte ese paphio